[发明专利]兔波氏杆菌LAMP检测用引物组、检测试剂盒和检测方法有效
| 申请号： | 201110397785.7 | 申请日： | 2011-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN102399890A | 公开（公告）日： | 2012-04-04 |
| 发明（设计）人： | 刘燕;鲍国连;李科;韦强;肖琛闻;季权安 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 | 代理人： | 王从友 |
| 地址： | 310021 浙江省杭州市石*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 兔波氏 杆菌 lamp 检测 引物 试剂盒 方法 | ||
1.兔波氏杆菌LAMP检测用引物组，其特征在于引物组包括：
外引物组1： GCTAGTTGGTGGGGTAACG
外引物组2： TTAGCCCGTGCCGTTTGT
内引物组1： TAGGAGTCTGGGCCGTGTCGTCCGTAGCTGGTTTGAGAGG
内引物组2： GGACAATGGGGGCAACCCTGCCTGCCAAAAGTGCTTTCCA。
2.兔波氏杆菌LAMP检测试剂盒，特征在于该试剂盒包含如下组分：引物组、阳性对照品、LAMP反应液、Bst DNA聚合酶和显色液，所述引物组为：
外引物组1： GCTAGTTGGTGGGGTAACG
外引物组2： TTAGCCCGTGCCGTTTGT
内引物组1： TAGGAGTCTGGGCCGTGTCGTCCGTAGCTGGTTTGAGAGG
内引物组2： GGACAATGGGGGCAACCCTGCCTGCCAAAAGTGCTTTCCA。
3.根据权利要求2所述的兔波氏杆菌LAMP检测试剂盒，特征在于：所述引物组中外引物组对和内引物组对添加的摩尔比为1：4～12。
4.根据权利要求2所述的兔波氏杆菌LAMP检测试剂盒，特征在于：所述的阳性对照品为含有兔波氏杆菌的基因组DNA。
5.根据权利要求2所述的兔波氏杆菌LAMP检测试剂盒，特征在于：所述的LAMP反应液中含有0.6～1.8 mmol/L dNTP ，1.25～3 mmol/L Mg2+， 0.2～1.4mol/L Betaine，2×Thermopol Buffer。
6.根据权利要求2所述的兔波氏杆菌LAMP检测试剂盒，特征在于：所述的Bst DNA聚合酶和显色液为市售，显色液优选为SYBR Green 。
7.兔波氏杆菌LAMP检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：
1）提供待测样品DNA；
2）在LAMP反应体系中加入权利要求1所述的引物组、LAMP反应液、BstDNA聚合酶，混匀，进行恒温扩增反应后灭活；
3）取灭活后部分产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，剩余产物加入显色液，观察显色结果，并同时对比阳性对照品的显色结果，若显色结果一致，说明待测样品中含有兔波氏杆菌，若显色结果不一致，则说明待测样品中不含有兔波氏杆菌。
8.根据权利要求7所述的兔波氏杆菌LAMP检测方法，其特征在于：所述的恒温反应的温度范围为60～65℃，反应时间为50～60min。
9.根据权利要求7所述的兔波氏杆菌LAMP检测方法，其特征在于：所述的恒温反应的温度范围为61℃，反应时间为50min。
10.根据权利要求7所述的兔波氏杆菌LAMP检测方法，其特征在于：所述灭活的温度为80℃，灭活时间为10min。
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