[发明专利]一种SPOP基因杂合性缺失的熔解曲线分析检测试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种SPOP基因杂合性缺失的高分辨率熔解曲线分析检测试剂盒在卵巢癌检测中的应用，其特征在于：该试剂盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲线分析的SPOP特异引物、LC480 HRM master mix、DNA提取试剂、阳性质控DNA、阴性质控DNA组成；

其中，高分辨率熔解曲线分析的SPOP特异引物由两对引物片段组成，其中一对扩增SPOP高频LOH区的序列，扩增片段长度为120bp；另一对引物扩增SPOP基因以外两端的序列，片段长度为100bp，其序列如下表。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂组成包括：

1对SPOP基因扩增引物；

1对SPOP基因外两端扩增引物；

LC480 HRM master mix；

DNA提取试剂；

阳性质控DNA；

阴性质控DNA。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述LC480 HRM master mix带有饱和荧光染料，激发波长440-470nm，发射荧光波长470-520nm。

4.根据权利要求1、2或3所述的应用，其特征在于：通过检测SPOP基因的杂合性缺失的情况，辅助临床诊断卵巢癌。

5.一种SPOP基因杂合性缺失的高分辨率熔解曲线分析检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒由卵巢癌抑癌基因SPOP高分辨率熔解曲线分析的SPOP特异引物、LC480 HRM master mix、DNA提取试剂和阳性质控DNA；阴性质控DNA组成；

其中，高分辨率熔解曲线分析的SPOP特异引物由两对引物片段组成，其中一对扩增SPOP高频LOH区的序列，扩增片段长度为120bp；另一对引物扩增SPOP基因以外两端的序列，片段长度为100bp，其序列如下表。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂组成包括：

1对SPOP基因扩增引物；

1对SPOP基因外两端扩增引物；

LC480 HRM master mix；

DNA提取试剂；

阳性质控DNA；

阴性质控DNA。

7.如权利要求5或6所述的检测试剂盒的检测方法，其特征在于：依次按下述步骤进行：

(1).按照DNA提取试剂即QIAamp DNA FFPE Tissue Kit操作说明提取组织DNA.

(2).配制总体积为10μl的PCR反应体系；

(3).反应条件：94℃预变性3min，94℃1min，59℃45S，72℃1min，30个循环，最后72℃延伸10min，在进行高分辨率熔解曲线分析之前，进行变性和复性处理：95℃30s，25℃2min，94℃30s，24℃3min，共2个循环；

(4).PCR反应完成后进行HRM分析，480荧光定量PCR仪从60℃开始，以0.05℃/s的斜率采集熔解曲线，到90℃结束，用480所配分析软件对采集后的曲线进行分析；

(5).检测曲线对比分析，获得结果。

8.如权利要求7所述的方法，其中配制总体积为10μl的PCR反应体系为：

依次配制样品PCR反应体系、阳性质控DNA PCR反应体系、阴性质控DNA PCR反应体系。