[发明专利]小分子有机物的量子点标记半抗原多组分直接竞争免疫分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及不同小分子有机物（农药、药物、环境内分泌干扰物）的纳米荧光探针标记多组分直接竞争免疫分析新技术。

背景技术

环境和农畜产品中农药、药物、环境内分泌干扰物多残留超标，对环境和环境生物构成一定威胁，影响食品安全和人类健康。加强环境和食品中多种残留物的监控，需要高效快速的多组分分析技术。

目前已报道的农药、药物、环境内分泌干扰物多残留检测方法主要有色谱法和色质联用法，采用这些方法需要昂贵的仪器设备、专业化的实验室和训练有素的专门人才，样品前处理要求高、过程复杂、速度慢，检测成本高，特异性不强，难以适应大量样品和现场快速检测的要求。现有小分子有机物多组分免疫分析，通常采用在聚苯乙烯微孔板的不同部位固定不同抗体或抗原，通过空间分辨进行不同免疫反应，反应在固相和液相界面进行，反应后通过洗涤方式实现固液分离，操作复杂；或采用不同标记物，如酶、荧光素等标记不同抗体或抗原，反应条件和检测手段难以兼容。因此，真正意义上的小分子有机物多组分免疫分析技术尚待建立。

发明内容

本发明的目的是以不同荧光发射波长的高效水溶性量子点作为纳米荧光探针标记不同目标分析物半抗原，建立一种特异性强、灵敏度高、简便高效、可同时快速检测多种小分子目标分析物（农药、药物、环境内分泌干扰物）的直接竞争免疫分析技术。

本发明的技术方案是：采用混合酸酐法或碳二亚胺法，将激发波长宽、荧光光谱窄、稳定性好、荧光发射波长不同的高效水溶性量子点分别与含活性羧基末端的不同目标分析小分子有机物半抗原共价偶联制备具有特征荧光发射波长的不同量子点标记半抗原。

将抗不同目标分析物的抗体分别固定于水分散性聚苯乙烯磁性微球表面，封闭微球表面未结合抗体的位点。

取适量固定有抗不同目标分析物抗体的聚苯乙烯磁性微球、对应目标分析物标样及对应的不同量子点标记半抗原，共同分散于磷酸盐缓冲液中，在室温下同时进行竞争性免疫反应，在同样条件下以待测样品和目标分析物空白代替标样，设置样品和空白对照反应体系。反应平衡后的体系在磁性微球分离器上使聚苯乙烯磁性微球与液相快速分离，在同一波长紫外光激发下对液相进行荧光扫描或多波长检测，测定标样和样品体系中各量子点标记半抗原的特征荧光强度（F_S）与目标分析物空白对照的特征荧光强度（F₀）之比（F_S/F₀）。

依据F_S/F₀与体系中对应目标分析物浓度在一定范围内成正比（聚苯乙烯磁性微球上结合的量子点标记半抗原的量与对应目标分析物浓度在一定范围内成反比）的规律，在条件优化的基础上建立各目标分析小分子有机物（农药、药物、环境内分泌干扰物）的量子点标记直接竞争免疫分析方法；根据待测样品中各目标分析物的F_S/F₀计算样品中对应目标分析物的含量，从而建立高灵敏度快速检测多种目标分析小分子有机物的量子点标记多组分直接竞争免疫分析技术。

本发明综合利用免疫分析特异性强、量子点荧光量子效率高而稳定、不同量子点可在同一激发波长下发射互不干扰的荧光、聚苯乙烯磁性微球可在水相中分散且可在磁场中与液相快速分离等优势。与常规免疫分析相比，本发明所建立的量子点标记半抗原多组分直接竞争免疫分析在同一水分散相中进行，平衡时间短；固相和液相可在磁场中快速分离，在同一激发波长下同时检测液相中不同量子点标记物的特征荧光强度，实现对多种目标分析小分子有机物的同时定性定量检测，省去了洗涤和显色反应步骤，操作简便快速，显著提高了检测效率和检测灵敏度，重现性好，是对现有小分子有机物多组分免疫分析技术的突破与创新，国内外尚未见报道。

附图说明

图1为量子点标记3种农药半抗原直接竞争多组分免疫分析荧光光谱图。

图2为量子点标记3种药物、环境内分泌干扰物半抗原直接竞争多组分免疫分析荧光光谱图。

具体实施方式

一、量子点标记农药半抗原多组分直接竞争免疫分析技术实施例：