[发明专利]用模式生物斑马鱼筛选诱导心肌细胞形成的药物的方法无效
申请号: | 201110403099.6 | 申请日: | 2011-12-07 |
公开(公告)号: | CN102520130A | 公开(公告)日: | 2012-06-27 |
发明(设计)人: | 钟涛 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | G01N33/15 | 分类号: | G01N33/15;C12Q1/02 |
代理公司: | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陆飞;盛志范 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 模式 生物 斑马 筛选 诱导 心肌 细胞 形成 药物 方法 | ||
1.一种用模式生物斑马鱼筛选诱导心肌细胞形成的药物的方法,其特征在于,具体步骤为:
(1)、对从药物库中取出的各种不同结构的小分子化合物,用二甲亚砜作为助溶剂,配成1mM的储存液;在表型筛选时,将每种化合物用胚胎培养液稀释成1-30μM ;
(2)、使心脏转基因斑马鱼Tg(cmlc2:EGFP)纯合体进行交配,获得胚胎,培养至50%外包期;然后将胚胎转移至培养板中,每孔置入适量胚胎,同时加入不同小分子化合物的胚胎培养液,在20-30℃胚胎培养箱进行培养;其中,二甲亚砜作为空白对照组;在胚胎发育的不同阶段,对胚胎心脏大小和心脏形态进行仔细的检查,并且通过细胞核标记的转基因斑马鱼Tg(cmlc2:DsRed-nuc)进行心肌细胞计数;最后对实验结果进行初步判定,分析各个小分子化合物对心肌细胞形成的影响;
(3)、检查胚胎的整体形态,及其它器官包括大脑,眼睛,脊索和体节等是否受到影响;通过观察结果分析判定各个小分子化合物是否对胚胎其它器官有毒性作用。
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