[发明专利]一种检测CYP1A2基因多态性的液相芯片方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测CYP1A2基因多态性的液相芯片方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)包含多种不同荧光编码的微球Beads，每种微球上分别共价结合针对CYP1A2的基因多态性位点所设计的特异性核酸探针；所述的CYP1A2的基因多态性位点包含以下突变基因的任意一种或两种或加上其它突变基因的组合：CYP1A2*1F(-163C＞A)、CYP1A2*1D(-2467delT)；

(2)针对CYP1A2的多种突变基因，分别设计上下游引物，其中一条引物含有生物素Biotin标记；对不同的突变基因的DNA，通过PCR扩增出相应的产物；

(3)将步骤(1)含有特异性核酸探针的微球与步骤(2)CYP1A2突变基因的PCR扩增产物混合杂交，加入链霉亲和素-藻红蛋白Streptavidin-PE后，通过液相芯片xMAP方法检测荧光信号；

(4)根据检测到的荧光信号，从而确定检测样品中是否存在CYP1A2突变基因，并对其基因多态性进行鉴定分型。

2.如权利要求1所述的检测CYP1A2基因多态性的液相芯片方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的微球是一种颜色编码微球Color-coded Beads，且结合了不同荧光染料的聚苯烯微球。

3.如权利要求1所述的检测CYP1A2基因多态性的液相芯片方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的共价结合于微球上的针对CYP1A2的基因多态性位点所设计的特异性核酸探针，包括如下序列，其中5’端含氨基修饰：

野生型CYP1A2*1F-wt：5’-AminolinkerC12ATGCGTCCTGGGCCCACAGAG-3’，如SEQ ID NO.1所示；

突变型CYP1A2*1F-mut：5’-AminolinkerC12ATGCGTCCTGTGCCCACAGAG-3’，如SEQ ID NO.2所示；

野生型CYP1A2*1D-wt：5’-AminolinkerC12GTTGGGGTTCATGTGCCACAA-3’，如SEQ ID NO.3所示；

突变型CYP1A2*1D-mut：5’-AminolinkerC12GTTGGGGTTCTGTGCCACAA-3’，如SEQ ID NO.4所示

或者包含有上述序列或其互补序列的向5’端或/和3’端延长的序列；

或者与上述序列或其互补序列的同源性大于85％的序列；

或者与上述序列的碱基互补序列；

或者使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。

4.如权利要求1所述的检测CYP1A2基因多态性的液相芯片方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的针对CYP1A2的多种突变基因所设计的上下游引物，包括如下序列，其中上游引物5’端含生物素Biotin标记：

CYP1A2*1F：上游引物5’-biotin CAGCGTTCATGTTGGGAATCTT-3’，如SEQ ID NO.5所示；下游引物5’-GCTGAGGGTTGAGATGGAGACAT-3’，如SEQ ID NO.6所示；

CYP1A2*1D：上游引物5’-biotin AGGCTGAGGCAAGAGGATTGT-3’，如SEQ ID NO.7所示；下游引物5’-AGGAGGAGGACAAGCCTTAAATTG-3’，如SEQ ID NO.8所示；

或者包含有上述序列或其互补序列的向5’端或/和3’端延长的序列；

或者与上述序列或其互补序列的同源性大于85％的序列；

或者与上述序列的碱基互补序列；

或者使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。

5.一种检测CYP1A2基因多态性的试剂盒，其特征在于，包含：权利要求1-4任一项中所述的共价结合了针对CYP1A2基因多态性位点的特异性探针的微球混合物、权利要求1-4任一项中所述的CYP1A2突变基因的上下游引物、链霉亲和素-藻红蛋白和质控品。

6.如权利要求5所述的检测CYP1A2基因多态性的试剂盒，其特征在于，所述的微球混合物，根据不同检测样品的需要自由组合。