[发明专利]芽胞杆菌Gxw4-2培育及其防治害虫方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及从罹病死亡的植物害虫体内提取芽胞杆菌GXW4-2(拉丁文名称为Bacillus sp.GXW4-2)、采用二级培养法培育芽胞杆菌Gxw4-2获得一种生物杀虫剂、经稀释后喷施于植物表皮用于植物鳞翅目害虫防治的方法。 

背景技术

小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟、林木刺蛾等重大鳞翅目害虫是作物常见抗药性较强的害虫，危害轻者造成农作物生物产量和经济产量下降，危害重者导致农作物颗粒无收。近年来，国际上很多发达国家投入相当大的人力、财力研制生物农药，但生物杀菌剂产品开发的较多，生物杀虫剂新产品的开发进展不快。就对化学农药抗药性较强的小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟、林木刺蛾等重大鳞翅目害虫的生物农药应用而言，目前市场上的主要产品仍然是苏云金杆菌(BT)及其与化学农药的复配品。由于长期使用化学杀虫剂，导致目前作物害虫的抗药性逐渐增强，同时对环境生态造成负面影响。 

微生物杀虫剂主要抑制鳞翅目害虫体内的新陈代谢、干扰生物合成和破坏鳞翅目害虫细胞结构，杀虫速度快、防效高、毒性低，兼有刺激植物生长的作用。 

小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟、林木刺蛾等重大鳞翅目害虫属常发性害虫，抗药性较强，采用一般药剂防治效果较差。采用芽胞杆菌gxw4-2防治重大鳞翅目害虫，是克服农产品化学农药负面效应的有效途径之一。 

发明内容

针对目前农作物生产中危害性大、抗药性强、一般药剂防治效果差的小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟、林木刺蛾等重大鳞翅目害虫，提出芽胞杆菌gxw4-2培育及其防治害虫方法，创制一种新的生物杀虫剂。该生物杀虫剂可以高效杀灭小菜蛾、斜纹夜蛾、水稻纵卷叶螟、林木刺蛾等重大鳞翅目害虫，并且安全环保。 

本发明涉及的芽胞杆菌GXW4-2(拉丁文名称为Bacillus sp.GXW4-2)是申请人从罹病死亡的害虫尸体中发现的。该菌株于2011年1月21日在武汉中国典型培养物保藏中心CCTCC保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M2011027。 

芽胞杆菌gxw4-2再生能力强，可在工厂化条件下大量繁殖，主要基质原料是可再生农产品资源，且国内外市场上货源丰富，完全可以满足产业化生产的需要。 

本发明的最终产品是生物杀虫剂，包括芽胞杆菌gxw4-2悬浮剂和芽胞杆菌gxw4-2母药。 

芽胞杆菌gxw4-2杀虫剂防治植物害虫的机理是经害虫的口器进入体内，在害虫腹、血腔组织等靶标处大量增殖，产生生化病变、生理病变、细胞学病变，致使肠道上出现许多小红点并导致肠组织溶解。经试，用药后24小时，害虫腹腔组织发生病变，并伴随其代谢过程释放出异味(氟)气体和组织溶解酶，最后导致害虫窒息死亡直至解体。 

国内外尚未有用芽胞杆菌gxw4-2制造植物害虫杀虫剂的先例。 

附图说明

图1为芽胞杆菌GXW4-2杀虫剂制造工艺图。 

实施例

1、芽胞杆菌gxw4-2二级培育步骤 

(1)解剖罹病死亡的害虫尸体，分离、提取芽胞杆菌Gxw4-2菌株。 

(2)将LB培养基装入容器中，加入重量百分比为2％的钙粉，灭菌。当培养容器温度为28-32℃时，将芽胞杆菌Gxw4-2接种于培养容器中，在28-32℃生化培养箱内培养24小时获得芽胞杆菌GXW4-2菌落。 

(3)将不加琼脂的LB培养基煮沸后过滤，在滤液中加入重量百分比为2％的钙粉，灭菌后得到培养液。待培养液冷却至32-36℃时，将步骤(2)所得胞子在无菌条件下接种至培养液中，在溶氧13-15％、PH6-8、温度范围32-36℃的环境下发酵36-38小时，得到≥105亿个胞子/ml芽胞杆菌GXW4-2悬浮液。 

(4)将培养的105亿个胞子/ml芽胞杆菌GXW4-2悬浮液离心脱水后转至冷冻干燥箱内，经-5℃、-15℃、-75℃条件下冷冻干燥，使其水份含量小于3％，经200目粉碎后，得到生物杀虫剂≥500亿个胞子/g芽胞杆菌GXW4-2菌种(原药)。 

2、芽胞杆菌gxw4-2毒力及杀虫效果 

(1)芽胞杆菌gxw4-2之105亿个胞子/ml悬浮剂室内毒力测定结果见表1、表2。 

表1芽胞杆菌gxw4-2对小菜蛾的室内毒力测定原始数据记载表 

(浸叶法 3龄幼虫) 

表2芽胞杆菌gxw4-2对小菜蛾的室内毒力测定结果  (浸叶法 3龄幼虫)