[发明专利]一种海洋真菌梅花状青霉及其提取物和应用

说明书

技术领域：

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83，以及从该菌株的液体培养菌丝体中制备的发酵提取物，和该提取物在制备抗细菌、真菌药物和抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

恶性肿瘤又称为癌症，是一种危害人类生命和生活质量的主要疾病之一。据世界卫生组织统计，世界上每年有1000万人患上癌症，约有600万人死于癌症，占全球死亡人数的12％。而且由于吸烟人数增多，体育运动减少，饮食中缺少果蔬等不良习惯可能会导致患癌症的人数增多。我国卫生部在第21届世界抗癌大会上指出，中国每年癌症发病人数为260万，而死亡人数达180万，已成为中国城市和农村居民的第一位死亡原因，寻找有效的抗癌药物是世界上新药开发的重点领域。

随着环境污染的加剧，新的感染性疾病发生和耐药菌株的大量出现，正日益严重地威胁着人类健康，人们不得不寻求新的抗菌药物以应对不断产生的耐药菌株，因此，寻找新的抗菌药物也是世界上新药开发的重点领域。

由于陆栖微生物活性物质的大量开发和应用，寻找新种属或特殊性状的微生物及其代谢产生的新型抗菌、抗肿瘤药物越来越难，于是，人们将目光纷纷投向海洋。海洋真菌是海洋微生物的重要组成部分，这类真菌不但种类多，分布广，而且生存在低温、高压、高盐、高寒、寡营养等独特的环境中，必然会产生一些与陆地真菌不同的代谢系统和防御物质，包括抗菌、抗肿瘤、抗病毒等活性物质，研究人员从中发现了一些具有生物活性的新天然产物，包括一些具有新颖骨架的化合物。因此，海洋真菌在发掘药物先导化合物方面有很大的潜力，从海洋真菌中寻找新的抗菌、抗肿瘤药物已成为当今世界新药的研发热点。

发明内容：

本发明的第一目是提供一种海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83，该菌株于2011年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO：M 2011415。

本发明的海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83是从南海(106°30.295′E，10°0.941′N)1675m深处的海泥中分离、纯化得到。其分离纯化方法为：将海泥样品用含30％粗海盐的无菌水稀释到10％，27℃振荡20min，取0.1mL均匀涂布在改良PDA固体培养基中，26～28℃恒温箱培养，待菌落长出后，挑取菌落划线纯化得到。所述改良PDA固体培养基是在每升PDA培养基中加入KH₂PO₄3g、MgSO₄0.75g、维生素B₁10mg、粗海盐30g、琼脂20g。

通过形态学研究，并根据《真菌鉴定手册》(魏景超，1979)，该菌株鉴定为梅花状青霉(Penicillium herquei)，命名为梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83，于2011年11月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，其保藏编号为CCTCCNO：M 2011415。

其形态特征如下：在改良PDA固体培养基上菌落黄绿色，背面黄褐色至暗绿色，绒状或絮状，具不明显辐射状沟纹；分生孢子梗发生于基质和气生菌丝，壁粗糙，具疣状突起，黄绿色；帚状枝双轮生，梗基每轮5-9个，7.5～12×2.5～4.0μm。分生孢子球形，光滑，淡绿色，2.5～4.5×2.0～3.5μm。

根据常规方法提取该菌株的DNA，并利用真菌的ITS区的通用引物扩增其ITS区，其ITS区的碱基序列如下SEQ ID NO.1所示，提交GeneBank，其GenBank基因登录号为：JQ034358，通过在GenBank中进行blast检索，与其相似度最高的两条序列均为梅花状青霉(Penicillium herquei)，相似度达99.1％，因此也确定该菌株为梅花状青霉(Penicillium herquei)。

本发明的第二个目的是提供一种具有抗菌、抗肿瘤作用的海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83发酵提取物，其特征在于，以海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83作为发酵菌株，液体发酵获得发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，取菌丝体用石油醚或丙酮或无水乙醇或95％乙醇水溶液冷浸，优选是用无水乙醇冷浸，冷浸液经浓缩后即得海洋真菌梅花状青霉(Penicillium herquei)FS83发酵提取物。