[发明专利]具有肿瘤靶向、体内示踪和治疗作用的脂质体药物组合物及制备方法

权利要求书

1.一种具有肿瘤靶向、体内示踪和治疗作用的脂质体药物组合物，其特征在于此脂质体药物组合物由磷脂双份子层的脂质体核心和靶标分子抗CD44抗体组成，并能携带有示踪作用和治疗作用的报告基因，也能包裹阿霉素。

2.一种携带有示踪作用和治疗作用报告基因的靶向脂质体药物组合物的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

(1)1，2-油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、胆固醇、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DOPE-PEG2000)和1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺(DOPE-PEG2000-Mal)，按原始摩尔比为40∶40∶40∶6∶3的比例混合，溶于甲醇中；

(2)利用旋转蒸发仪使步骤(1)的溶液蒸发，形成脂质体膜；

(3)步骤(2)形成的脂质体膜用磷酸盐缓冲液(PBS)水化一小时，使得总脂质浓度为3.32毫摩尔每升；

(4)超声使步骤(3)得到的溶液成为微小均一的脂质球，过100纳米的多聚碳酸酯膜，成为粒径在100纳米的均一脂质体；

(5)按抗体与DOPE-PEG2000-Mal的摩尔比为1∶50将抗CD44抗体加入步骤(4)得到的脂质体中，利用巯基与脂质体上的PEG链结合，得到靶向脂质体；

(6)构建同时含有海肾荧光素酶、红色荧光蛋白和自杀基因胸苷激酶三融合基因的报告基因表达质粒；

(7)报告基因与脂质体的偶联，将脂质体与步骤(6)构建的报告基因表达质粒按每100微升脂质体20微克质粒的比例混合，利用脂质体表面的正电荷与质粒携带的负电荷集合，形成靶向脂质体-DNA复合物，即为脂质体药物组合物。

3.一种携带有阿霉素的靶向脂质体药物组合物的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

(1)1，2-油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、胆固醇、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DOPE-PEG2000)和1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺(DOPE-PEG2000-Mal)，按原始摩尔比为40∶40∶40∶6∶3的比例混合，溶于甲醇中；

(2)利用旋转蒸发仪使步骤(1)的溶液蒸发，形成脂质体膜；

(3)步骤(2)中形成的脂质体膜用300毫摩尔每升的(NH4)₂HPO₄水化一小时，使得总脂质浓度为3.32毫摩尔每升；

(4)超声使步骤(3)得到的溶液成为微小均一的脂质球，过100纳米的多聚碳酸酯膜，使其成为粒径在100纳米的非靶向脂质体；

(5)按照每毫升脂质体1毫克浓度为10mg/ml的阿霉素的比例向步骤(4)得到的脂质体中加入阿霉素，混合均匀，55℃反应1小时，室温放置过夜，利用脂质体内外的磷酸盐梯度，使阿霉素进入脂质体；

(6)过层析柱PD-10纯化，用水洗脱，去除没有被包裹的阿霉素；

(7)按抗体与DOPE-PEG2000-Mal的摩尔比为1∶50的比例向步骤(6)纯化后的脂质体中加入抗CD44抗体，利用巯基与脂质体上的PEG链结合，得到阿霉素靶向脂质体。