[发明专利]毕赤酵母制备人白细胞介素29成熟肽的方法无效
申请号: | 201110413183.6 | 申请日: | 2011-12-13 |
公开(公告)号: | CN102533840A | 公开(公告)日: | 2012-07-04 |
发明(设计)人: | 陈伟;郑海军;于明磊;郁心;邬敏辰;吴静 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N15/81 | 分类号: | C12N15/81;C12N1/19;C12N15/23;C12P21/02;C07K14/57;C07K1/18;C07K1/16;C12R1/84 |
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地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 酵母 制备 白细胞 29 成熟 方法 | ||
1.一种人白细胞介素29(hIL-29)成熟肽的重组真核表达载体,其特征在于,所述的重组真核表达载体中插入了hIL-29成熟肽的编码基因。
2.如权利要求1所述的重组真核表达载体中的hIL-29成熟肽的编码基因,其DNA的核苷酸序列对应于序列表中的SEQ ID NO:1。
3.如权利要求1所述的重组真核表达载体中的hIL-29成熟肽的编码基因,其编码产物的氨基酸序列对应于序列表中的SEQ ID NO:2。
4.一种重组毕赤酵母工程菌,其特征在于,所述的重组毕赤酵母的染色体中整合有权利要求1所述的hIL-29成熟肽的编码基因,并且分泌表达hIL-29成熟肽至培养液中。
5.一种制备人白细胞介素29成熟肽的方法,其特征在于,包括步骤:
(1)用适当的培养液,培养权利要求4所述的重组毕赤酵母工程菌;
(2)在培养液中添加适当的诱导剂,诱导重组毕赤酵母工程菌分泌表达hIL-29成熟肽;
(3)从培养液中分离纯化出重组毕赤酵母分泌表达的hIL-29成熟肽。
6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤(1)所用的培养液为BMGY培养液和BMMY培养液;步骤(2)所用的诱导剂为甲醇,添加甲醇的终浓度为培养液体积的0.5~1%;步骤(3)所用的分离纯化hIL-29成熟肽的方法为先用强阳离子型离子交换层析分离培养液中的hIL-29成熟肽,再用凝胶过滤层析得到纯化的hIL-29成熟肽。
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