[发明专利]针对β伴大豆球蛋白β亚基的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种针对β伴大豆球蛋白β亚基的单克隆抗体及其应用。

背景技术

大豆作为人和动物优质的植物蛋白和油脂来源，具有极高的营养价值，被广泛应用。大豆中的蛋白质约占大豆籽粒的40％，但其中含有胰蛋白酶抑制因子、凝集素、异黄酮、抗原蛋白等多种抗营养因子。大豆抗原蛋白是大豆中能引起人、畜、禽过敏反应的一类蛋白质，主要包括：大豆疏水蛋白(免疫学命名为Gly m1)、大豆壳蛋白(Gly m2)、大豆抑制蛋白(Gly m3)、大豆球蛋白(glycinin)和β伴大豆球蛋白(β-conglycinin)等。

目前研究证实，大豆球蛋白和β伴大豆球蛋白是含量最丰富、免疫原性较强的大豆抗原蛋白，两者共占大豆籽实总蛋白的65-80％。β伴大豆球蛋白是大豆中的一种主要贮藏蛋白，分子量为140-180kDa，占大豆籽实总蛋白的10.0-12.7％，占总球蛋白的30.0％。β伴大豆球蛋白含有很多的糖基(3.8％甘露糖和1.2％氨基葡萄糖)，糖基通过N-乙酰葡萄糖胺形式结合在肽链的天冬氨酸残基上，因此β伴大豆球蛋白是一类糖基化蛋白质。β伴大豆球蛋白的二级结构中，α-螺旋、β-折叠和不规则结构分别占5％、35％和60％。β伴大豆球蛋白由α、α’和β三种亚基组成，三种亚基的分子量分别为58-77kDa、58-83kDa和42-53kDa，三种亚基都富含天冬氨酸/天门冬酰胺、谷氨酸/谷氨酰胺、亮氨酸和精氨酸，热稳定性顺序为：β＞α’＞α，抗原活性顺序为α’＞α＞β。

β伴大豆球蛋白作为含量丰富、热稳定性强、具有较强免疫原性的大豆抗原蛋白，经常引起过敏反应。能引起婴幼儿、5-6％的儿童和2-4％的成年人腹泻，严重的伴有颤抖、咽喉水肿和急性哮喘等症状。在畜牧行业，可导致断乳仔猪和妊娠母猪、犊牛、大鼠等幼龄动物的过敏反应，常表现为腹泻、生长性能下降直至死亡。

β伴大豆球蛋白是热稳定性的抗原蛋白，直接加热并不能彻底破坏其抗原活性。经过加热处理的大豆制品中具有抗原活性的球蛋白残留量仍高达18％，足以引起婴儿的过敏反应。所以，大豆、豆制品、豆粕饲料中β伴大豆球蛋白含量的检测具有重要的理论意义应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种针对β伴大豆球蛋白β亚基的单克隆抗体及其应用。

本发明保护抗β伴大豆球蛋白β亚基单克隆抗体杂交瘤细胞株5C5(简称杂交瘤细胞株5C5)，已于2011年12月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.5555。杂交瘤细胞株5C5能够稳定的产生单克隆抗体。

杂交瘤细胞株5C5分泌的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。本发明提供的单克隆抗体，可以特异地识别β伴大豆球蛋白分子β亚基，效价高、亲和性高、反应特异性强、无交叉反应。用本发明的单抗进行检测，检测范围广(3ng/ml～100ng/ml)，灵敏度高(3ng/ml)，变异系数小，成本低，操作简便，可以实现高通量检测。本发明的单克隆抗体具有如下应用前景：(1)作为研究大豆抗原性的工具，进行大豆种质资源筛选、品种改造；(2)制备免疫亲和柱，分离纯化β-伴大豆球蛋白；(3)进行动物实验研究；(4)FITC标记β-伴大豆球蛋白单克隆抗体，用于临床诊断或辅助诊断对大豆食物过敏的患者；(5)应用该抗体进行免疫组化检测β-伴大豆球蛋白在器官组织、各种体液的分布；(6)应用该抗体作为β-伴大豆球蛋白的拮抗剂，可以进行药理学研究，用于治疗大豆抗原蛋白过敏性疾病。

所述单克隆抗体可用于制备检测β伴大豆球蛋白的试剂盒。

本发明还保护一种检测β伴大豆球蛋白的试剂盒，包括所述单克隆抗体。所述试剂盒还可包括以β伴大豆球蛋白为免疫原得到的多克隆抗体。所述多克隆抗体具体可为将所述β伴大豆球蛋白免疫兔子得到的多克隆抗体。所述试剂盒还可包括β伴大豆球蛋白。

所述试剂盒可用于检测待测样本中是否含有β伴大豆球蛋白。

本发明还保护一种检测待测样本中是否含有β伴大豆球蛋白的方法，是应用所述试剂盒通过双抗夹心ELISA检测待测样本中是否含有β伴大豆球蛋白；所述双抗夹心ELISA中的双抗为所述单克隆抗体和所述多克隆抗体；所述双抗夹心ELISA中，用所述单克隆抗体包被酶标板；所述双抗夹心ELISA中，采用针对所述多克隆抗体的酶标二抗。

所述方法的具体包括如下步骤：

(1)将所述单克隆抗体包被酶标板(具体可采用10μg/ml或5μg/ml的包被浓度)；