[发明专利]一种桑树抗青枯病能力鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种桑树抗青枯病能力鉴定方法。

背景技术

桑树细菌性青枯病是威胁我国蚕桑生产的主要桑树病害之一，在华南蚕区发病尤为严重，目前种植抗青枯病的桑树品种是防治该病的最根本方法，但桑树种质资源中已经鉴定筛选出的用于抗青枯病育种的抗性材料较少，且由于桑树作为一种多年生木本植物，其抗青枯病能力的评价筛选方法与蔬菜和其它作物有很大不同，这些都严重制约着桑树抗青枯病新品种的选育。

目前对桑树抗青枯病材料的鉴定筛选主要是通过田间自然接种鉴定和室内人工接种鉴定等方法进行。田间自然接种鉴定，需在发生病害比较严重，土壤质地、肥力和发病程度均匀一致的地块进行，鉴定周期较长，且易受外界环境等因素影响，结果不稳定。室内人工接种主要是采用无土栽培大树悬浮液接种和离体桑枝注射接种等方法，前者由于桑树是多年生木本植物，接种费工、费时、成本高；后者虽然操作简单，但不足之处是必须依赖于成熟的离体培养体系，而目前桑树桑枝离体培养受品种类型等条件的制约，有些品种桑枝离体后即萎蔫，较难成活，因而难以进行抗青枯病材料的离体筛选。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桑树抗青枯病能力鉴定方法，该方法具有操作简单、结果准确可靠、重复性好特点。

本发明通过在室内将具有一定苗龄的待鉴定不同抗性品种或品系及抗、感病对照桑苗，水培一定时间后伤根接种于一定浓度的青枯病原菌菌液中，控制发病条件，一定时间后调查发病情况并按照一定抗性评价标准进行评价。

本发明的上述目的是通过如下技术手段来实现的：一种桑树抗青枯病能力鉴定方法，含以下步骤：

(1)桑苗的培育 培育待鉴定的不同品种或品系的桑树苗、感病对照桑树品种塘10×伦109的桑树苗和抗病对照桑树品种283×抗青10号的桑树苗；

(2)桑苗的处理 前期为苗圃育苗，后期为水培，待桑苗生长到3-5片叶，苗龄3-5个月时，将待鉴定及抗、感病对照桑苗小心移出植株，用水轻轻洗净根部育苗基质，移植于盛水容器中，水培成活一周后，用于抗病性鉴定；

(3)接种 将待鉴定的不同抗性品种或品系的桑树苗、感病对照桑树品种塘10×伦109桑树苗和抗病对照桑树品种283×抗10桑树苗侧根剪去，然后将伤根浸泡于桑树青枯病菌液中进行接种鉴定，获得不同抗病能力的桑树品种或品系。

本发明步骤(1)中培育待鉴定抗青枯病能力的不同抗性品种或品系的桑树苗、感病对照桑树品种塘10×伦109桑树苗和抗病对照桑树品种283×抗10桑树苗的过程是：将待鉴定抗青枯病能力的不同抗性品种或品系的桑种子、感病对照桑品种塘10×伦109的桑种子和抗病对照桑树品种283×抗10的桑种子播种于无青枯病发病史的苗圃中，按常规水肥条件管理。

本发明步骤(3)中桑树青枯病菌液中青枯病致病菌的浓度为3×10⁸～1×10⁹cfu/mL。

本发明步骤(3)中将待鉴定的不同抗性品种或品系的桑树苗、感病对照桑树品种塘10×伦109桑树苗和抗病对照桑树品种283×抗10桑树苗侧根剪去0.2～0.5cm，然后将伤根接种于待接种菌液中调节温度为28-35℃、空气相对湿度大于75％下进行接种鉴定。

本发明步骤(3)中反应不同抗病能力的桑树品种或品系的具体参数的获取过程为：从菌液处理伤根后第3天开始记录，前期每隔2天，11天后每隔3天调查记录发病情况及死亡株数，连续调查20天，计算病情指数。

选取感病对照桑树品种塘10×伦109桑苗病情指数达到80及以上时的数据，通过以下公式计算病情指数DI；

桑树青枯病病害严重度分级标准

0级：叶片无萎蔫症状；

1级：整株的1/2或以下叶片出现萎蔫症状；

2级：整株的1/2以上叶片出现萎蔫症状；

3级：整株死亡；

以病情指数DI评价各供试品种或品系的抗病程度，共分为5级，DI≤15时为强抗HR；15＜DI≤30为中抗MR，30＜DI≤45为弱抗LR，45＜DI≤60为感病S，DI＞60为易感HS。

本发明具有以下优点：

(1)本发明方法克服了传统鉴定方法中由于桑树是多年生木本植物，抗性鉴定费工、费时、成本高且环境条件无法控制导致抗性结果不理想等缺点，可以在室内一年多次大批量进行鉴定，具有操作简单、结果准确可靠、重复性好特点；

(2)本发明在桑树抗青枯病能力的鉴定、抗病资源的评价、抗病育种材料的筛选等方面应用潜力较大。