[发明专利]相对定量分析蛋白质磷酸化修饰水平的方法

权利要求书

1.一种无同位素标记相对定量分析蛋白质磷酸化修饰水平的方法，包括：将蛋白质酶解成肽段，利用不依赖母离子的串级质谱方法确定具有磷酸化位点的肽段，以及利用无标记定量方法对具有磷酸化位点的肽段进行相对定量分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在将蛋白质酶解成肽段的步骤和利用不依赖母离子的串级质谱方法确定具有磷酸化位点的肽段的步骤之间还包括富集磷酸化肽段的步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述富集磷酸化肽段的步骤包括：利用亲和纯化柱吸附肽段中的磷酸化肽段；从亲和纯化柱洗脱磷酸化肽段；以及收集洗脱的磷酸化肽段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述亲和纯化柱的基质为二氧化钛或金属铁/金属锆氧化物。

5.根据权利要求3所述的方法，其中在从亲和纯化柱洗脱磷酸化肽段之前还包括使用含有2，5-二羟基苯甲酸或谷氨酸的溶液润洗亲和纯化柱的步骤。

6.根据权利要求1所述的方法，其中利用无标记定量方法对具有磷酸化位点的肽段进行相对定量分析的步骤中还包括加入内标物质。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述内标物质是α/β-酪蛋白的酶解产物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中还包括将所述无同位素标记相对定量分析蛋白质磷酸化修饰水平的方法重复三次，进行统计分析的步骤。

9.根据权利要求1所述的方法，其中还包括评价所述无同位素标记相对定量分析蛋白质磷酸化修饰水平的方法的定量准确性的步骤。