[发明专利]一种食用菌单一型菌丝类母种的快速扩繁方法

说明书

       

（一）      技术领域

    本发明涉及生物领域，特别涉及一种食用菌单一型菌丝类母种的快速扩繁方法。

（二）      背景技术

    食用菌的大规模生产，离不开母种的扩大繁殖。母种是食用菌生产的基础，优质复壮的母种是食用菌高产栽培的先决条件。食用菌单一型菌丝类母种通常采用传统的一点式接种方法，发菌时间偏长，既影响生产，又因菌龄长、菌丝弱，造成再次扩繁时菌种活性下降，特别是珍稀食用菌尤为严重，因此必须要改进母种的接种方法。

（三）      发明内容

    本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种操作方法简易、接种速度快、发菌时间短的食用菌单一型菌丝类母种的快速扩繁方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种食用菌单一型菌丝类母种的快速扩繁方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）制备无菌水和试管斜面：

a.在三角瓶中加入水，瓶口用牛皮纸扎口；

b.玻璃试管使用18×180mm或20×200mm，棉塞使用梳棉，要求干燥、洁净，松紧适度；培养基采用加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基，其制备方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切碎，加80g麦麸，加水1000 mL文火煮沸20～30分钟后，用四层纱布过滤，再加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g和琼脂20g，继续加热搅拌混匀至琼脂融化，再补足水量至1000mL，在温度不低于70℃时将培养基分装至试管长度的1/4～1/5，试管口加梳棉塞，然后用牛皮纸在试管口棉塞外捆扎；

c.将盛有水的三角瓶和盛有加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管立即装入高压锅，0.11～0.12MPa高压灭菌30 min，灭菌后在5 min内将加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基摆成顶端距试管口30～50mm的斜面，摆成斜面培养基长度130mm，将无菌水和加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基冷却后备用；

（2）制备母种菌丝悬液：被扩母种最好是选用组织分离培养的优质健壮的母种，质量符合食用菌菌种通用技术要求NY/T 1742—2009标准，在无菌条件下，用无菌移液管或注射器在被扩母种试管内注入无菌水，用接种针拌碎生长有被扩母种的培养基，制成母种菌丝悬液；

（3）扩接：在无菌条件下，用无菌移液管或注射器抽取母种菌丝悬液5mL，在每一支步骤（1）制备的盛有加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基的扩接试管内注入2滴（约0.05mL）母种菌丝悬液摆平；

（4）培养：将扩接试管放入恒温培养箱内，按食用菌菌种通用技术要求（NY/T 1742—2009）恒温培养，可比常规接种方法缩短一半发菌时间，珍稀食用菌单一型菌丝类母种一般6～8d菌丝即可长满130mm的试管斜面培养基。

本发明食用菌单一型菌丝类母种的快速扩繁方法的有益效果是：所需设备简单，操作方法简易，成本低廉；接种速度快，5mL菌丝悬液可扩接100支母种，用时10～15 min；可大幅度缩短食用菌单一型菌丝类母种扩繁时的发菌时间，菌龄短且一致，菌丝活力旺盛，尤其是珍稀食用菌更加明显，为食用菌生产提供良好的基础，能使母种快速扩繁，满足食用菌大规模生产所需的优质、复壮母种。

（四）      具体实施方式

实施例1：黄伞母种的扩繁：

（1）制备无菌水和试管斜面：

a.在250mL三角瓶中加入100mL水，用牛皮纸扎口；

b.试管选用18×180mm，棉塞使用梳棉，干燥、洁净，松紧适度；培养基采用加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基，其制备方法为：先将马铃薯洗净去皮，再称取200g切碎，加80g麦麸，加水1000 mL文火煮沸20～30分钟后，用四层纱布过滤，再加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g和琼脂20g，继续加热搅拌混匀至琼脂融化，再补足水量至1000mL，在温度不低于70℃时将培养基分装至试管长度的1/4～1/5；试管口加棉塞，松紧适度，以提起棉塞试管不脱落，拔出棉塞有轻微的声音为适宜，然后7支试管为1组，用牛皮纸在试管口棉塞外捆扎在一起；

c.将盛有水的三角瓶和盛有加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基的试管立即装入高压锅，0.11～0.12MPa高压灭菌30 min，灭菌后5 min内将加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基摆成顶端距试管口30～50mm的斜面，摆成斜面培养基长度130mm，将无菌水和加富综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基冷却后备用；