[发明专利]一种利用微生物催化制备(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的方法

权利要求书

1.一株具有高立体选择性羰基还原酶活性的微生物菌株，其分类命名为克鲁维假丝酵母（Kluyveromyces sp.）JNU-KR1，现保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC NO：M 2011385。

2.用微生物CCTCC NO：M 2011385不对称氧化还原制备(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇的方法，(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇简写(S)-CPMA，其特征是以CCTCC NO：M 2011385全细胞为催化剂，在单一水相或双水相反应体系中对潜手性4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮CPMK进行不对称还原，制备具有高光学纯度的(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇，步骤如下：

（1）湿菌体的培养：培养基组成以g/L计为：葡萄糖5－50，酵母膏3－30，磷酸二氢钾 1－10，七水合硫酸镁 0.2－2，pH4－9，发酵培养1－5天，发酵液过滤获得湿菌体；

（2）配置反应体系：以4-氯苯基-(吡啶-2-基)-甲酮为底物，用磷酸盐缓冲液配制成的单一水相反应体系，底物浓度为0.1-10 g/L，葡萄糖浓度10－100 g/L；或用不同分子量的PEG与不同无机盐溶液配制成的各种双水相反应体系，底物浓度为0.5－20 g/L，葡萄糖浓度10－100 g/L；

（3）酶转化反应：在反应体系中加入CCTCC NO：M 2011385湿菌体50-250 g/L，于25-45 ℃进行酶反应，反应时间为3-72 h；

（4）转化液后处理：用乙酸乙酯萃取转化液，将萃取获得的有机相蒸发回收溶剂，采用硅胶柱层析进一步分离纯化，再干燥脱水，蒸发回收溶剂，获得无色油状液体产物(S)-(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)-甲醇。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于反应体系为由0.1－0.5 mmol/L、pH6－8 磷酸盐缓冲液配制的单一水相体系，或由分子量为2000－20000的不同PEG 与KH₂PO₄、Na₂HPO₄、(NH₄)₂SO₄ 或Na₂SO₄各种无机盐配制的不同双水相反应体系。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于酶转化反应条件为：底物浓度为1－10 g/L，湿菌体浓度50－250 g/L，反应温度25-35 ℃，反应时间12－72 h。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于在质量浓度20% PEG 4000 /质量浓度14% Na₂HPO₄双水相反应体系中，最终产物e.e.值达到85%，产率达到92%。