[发明专利]一种精制卵黄抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种精制卵黄抗体的制备方法。

背景技术

高免卵黄抗体目前被广泛应用于很多禽类烈性传染病的治疗和紧急预防，应用效果良好。卵黄中主要成分为蛋白质和脂肪，其质量比例为1∶2，由此说明卵黄中脂肪含量相当大的，一般卵黄抗体制备方法由于脂肪去除不完全，对治疗效果影响很大，常常会使禽体注射部位肿大，吸收缓慢，从而是卵黄抗体应用受到限制。

发明内容

本发明解决的技术问题是：提供一种精制卵黄抗体的制备方法，使其制出的卵黄抗体纯度高，安全性高。

为了解决上述技术问题，本发明包括如下步骤：

(1)收集经抗原强化免疫的产蛋鸡所产的高免鸡蛋；

(2)无菌分离出鸡蛋中的卵黄；

(3)用生理盐水配置的聚乙二醇溶液与卵黄原液混合，充分搅拌均匀，静止8～12小时，取上清液；

(4)再用灭菌纱布过滤上清液，加入0.1％的甲醛溶液沉淀48小时，取上清，即为所得卵黄抗体。

为了提高卵黄抗体提取的纯度，所述步骤(3)中卵黄原液体积量取n倍的无菌生理盐水(1＜n＜5)；按卵黄原液重量y克，称取x克(m％y＝x，1＜m＜10)的聚乙二醇。将聚乙二醇充分溶解于无菌生理盐水中，配制成聚乙二醇溶液，高压灭菌，放置至室温，备用。

为了保证卵黄抗体使用的安全性，所述步骤(4)中所获得卵黄抗体原液用0.1％甲醛，沉淀48小时。提高了卵黄抗体的使用安全性。

本发明所得卵黄抗体其保存温度为0～20℃，这样保证使了用中抗体的活性。

本发明原材料简单易购，成本低廉，操作简单副作用小，提高效益。

3、本发明中高免蛋的来源为在产蛋周期中健康的产蛋鸡只，经过21天强化免疫后，所产的鸡蛋，为高免蛋。

具体实施方式1

本具体实施例包括下列步骤：

(1)用新城疫油乳剂灭活疫苗免疫产蛋集群，共免三次，每次免疫间隔7天，抗原用量为每次每只鸡1ml，采用肌肉注射。最后一次免疫两周后，收集鸡蛋。

(2)高免蛋消毒：3～5％新洁尔灭消毒液浸泡30分钟，取出后用碘矴溶液再次进行表面消毒，最后用75％乙醇溶液进行脱碘及消毒。放入超净台内晾干，备用。

(3)在无菌条件下对步骤(2)消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂，打开，将卵清与卵黄分离开，将卵黄收集于灭菌容器内，封口。

(4)对步骤(3)的卵黄原液进行称重，得到y克。

(5)在无菌条件按步骤(4)中卵黄原液体积量取n倍的无菌生理盐水(1＜n＜5)；按卵黄原液重量y克，称取x克(m％×y＝x，1＜m＜5)的聚乙二醇。将聚乙二醇充分溶解于无菌生理盐水中，配制成聚乙二醇溶液，高压灭菌，放置至室温，备用。

(6)在无菌条件下将步骤(4)与步骤(5)中的两种溶液混合，充分搅拌30～40分钟，待两种液体完全混合均匀后，4℃静置8～12小时，溶液分为两层，取出上清。

(7)在无菌条件下将步骤(6)所获得卵黄抗体原液用0.1％甲醛，再沉淀48小时，取上清。

(8)制成成品，0～20℃保存。

具体实施方式2

本具体实施例包括下列步骤：

(1)用新城疫油乳剂灭活疫苗免疫产蛋集群，共免三次，每次免疫间隔7天，抗原用量为每次每只鸡1ml，采用肌肉注射。最后一次免疫两周后，收集鸡蛋。

(2)高免蛋消毒：35％新洁尔灭消毒液浸泡30分钟，取出后用碘矴溶液再次进行表面消毒，最后用75％乙醇溶液进行脱碘及消毒。放入超净台内晾干，备用。

(3)在无菌条件下对步骤(2)消毒处理后的鸡蛋从中间敲裂，打开，将卵清与卵黄分离开，将卵黄收集于灭菌容器内，封口。

(4)对步骤(3)的卵黄原液读取体积，得到Xml。

(5)在无菌条件按步骤(4)中卵黄原液体积量取n(2-5)倍的无菌生理盐水；按卵黄原液体积Y％(5-10)，称w克的聚乙二醇6000。将聚乙二醇充分溶解于无菌生理盐水中，配制成聚乙二醇溶液，高压灭菌，放置至室温，备用。

(6)在无菌条件下将步骤(4)与步骤(5)中的两种溶液混合，充分搅拌30～40分钟，待两种液体完全混合均匀后，4℃静置8～12小时，溶液分为两层，取出上清。对上清液离心，再次取上清。

(7)在无菌条件下将步骤(6)所获得卵黄抗体原液用0.1％甲醛，37℃灭活48小时。

灌装制成成品，0～20℃保存。

此方法既保留了卵黄内的抗体，又对残留微生物进行了灭活。大大提高卵黄抗体使用的安全性。此方法成本低，获得卵黄抗体纯度高，操作简单，适合量产。