[发明专利]一种CD106阳性细胞、其鉴定、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞的分离和制备，专利涉及一种具有更强免疫抑制能力的CD106间充质干细胞的分离制备办法。

背景技术

大量的体内、体外研究表明，间充质干细胞（mesenchymal stemcell，MSC）能够直接抑制T细胞的增殖、分化及其效应机制，或者通过抑制树突细胞（dendritic cell，DC）的分化和成熟，间接抑制T细胞的增殖，以及影响效应T细胞亚群的分化。除了T淋巴细胞和DC，MSC的靶细胞还包括众多其他类型的免疫细胞，如NK细胞（natural killer cell, NK）、B细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等，调节这些细胞免疫生物学活性，如细胞因子的分泌，细胞毒活性等，最终诱导抗炎效应和/或免疫耐受状态。目前对MSC的免疫调节机制还不完全清楚，但是普遍认为MSC主要通过细胞间接触和可溶性因子的分泌发挥免疫抑制功能。

多种可溶性因子参与MSC介导的免疫调节效应，它们可能直接来源于MSC，或者通过MSC和靶细胞交互作用旁分泌产生。目前研究较多的可溶性因子是前列腺素E2（PGE2）和人吲哚胺2,3-双加氧酶( IDO)。MSC组成性表达一种对PGE2合成起关键作用的酶，即环氧化酶2（Cyclooxygenase，COX-2）。MSC和外周血单个核细胞（PBMC）共培养可引起PGE2的分泌上调，炎性细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）能提高MSC释放PGE2的水平。从受体支气管肺泡灌洗液中分离的同种异源MSC具有合成PGE2的能力，体内外可以利用化学抑制剂阻断PGE2的生成来减轻MSC介导的免疫抑制功能，这些结果表明PGE2是参与MSC免疫调节效应的关键分子。MSC不组成性表达IDO，但是靶细胞来源的IFN-γ可诱导MSC表达IDO。IDO是色氨酸降解为犬尿氨酸过程中的限速酶，而色氨酸是T细胞增殖所必需的氨基酸，其降解产物的堆积对T细胞增殖有抑制作用，这样，在IFN-γ存在下，MSC表达IDO，加速色氨酸的代谢，抑制T淋巴细胞的增殖。其他参与MSC免疫调节的可溶性因子包括转化生长因子-β1（TGF-β1）、肝细胞生长因子（HGF）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-6（IL-6）、可溶性组织相容性白细胞抗原-G5（HLA-G5）、一氧化氮（NO）和半乳糖凝集素-9（Galectin-1）等，它们可能通过诱导调节性T细胞的生成、影响效应靶细胞的增殖、凋亡以及效应因子的分泌等途径介导MSC的免疫抑制功能。NO则更多参与小鼠MSC介导的免疫抑制效应。

多种因素影响MSC的免疫调节能力，其中最重要的因素可能是细胞因子微环境。目前研究发现IFN-γ的分泌可能对MSC的免疫功能起重要作用。高浓度的IFN-γ可提高MSC的免疫抑制能力，导致MSC 对NK细胞的抑制效应占优势。体外炎性因子如TNF-α和IFN-γ也可引起MSC的COX-2和PGE2表达上调，通过PGE2依赖的方式抑制免疫应答。炎性因子作用MSC能上调黏附分子VCAM-1和ICAM-1，有助于MSC与T细胞的黏附，从而发挥其T细胞增殖的抑制功能。可以说，MSC所具备的这种免疫抑制特点使之在医学上有巨大的应用潜力，可以应用于器官移植中排异反应以及各种自身免疫性疾病的治疗等多种情况。然而，常规制备的MSC是一个不均一的干细胞群体，并非所有的MSC都具备均一的较强免疫抑制能力，其到目前为止，尚未有某种成熟的公开技术能够从MSC细胞群体中特异性地鉴别并获取较高免疫抑制能力的细胞群体。