[发明专利]转录激活因子IE1有效
| 申请号： | 201110423279.0 | 申请日： | 2011-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN102517301A | 公开（公告）日： | 2012-06-27 |
| 发明（设计）人： | 夏庆友;王峰;徐汉福;马三垣;赵萍;向仲怀 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/34 | 分类号： | C12N15/34;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400715*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转录 激活 因子 ie1 | ||
1.转录激活因子IE1，其特征在于，如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
2.转录激活因子IE1的制备方法，其特征在于：以家蚕BmNPV基因组作为模板，设计特异性上游引物F: 5'CGCggatccATGACGCAAATTAATTTTAA3'和下游引物为R:5' ATTTgcggccgcTTAATTAAATTCAA3'，利用PCR扩增，得转录激活因子IE1。
3.根据权利要求2所述的转录激活因子IE1的制备方法，其特征在于：扩增条件为：94℃预变性4分钟，94℃变性30秒，55℃退火30秒，72 ℃延伸90秒，共30个循环, 最后72 ℃延伸10 min。
4.含有权利要求1所述转录激活因子IE1的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体含有转录激活因子IE1和终止子SV40，所述转录激活因子IE1下游的NotI酶切位点与终止子SV40上游的NotI酶切位点连接。
6.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pBac[3xp3-Red,Pser1IE1sv40]，所述重组载体以pBac[3xp3Redaf]转基因家蚕表达载体为骨架，依次连接以眼神经组织特异启动子3xp3及其驱动的红色荧光蛋白基因Red，如SEQ ID NO:5为核苷酸序列的丝胶I基因启动子，IE1作为目的基因和sv40转录终止子。
7.权利要求4所述的重组载体的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
A 中间载体psl1180[Pser1IE1sv40]的构建
将如SEQ ID NO:5所示的启动子Pser1、如SEQ ID NO:1所示的转录激活因子IE1以及转录中止信号sv40依次连接至pSLfa1180fa载体载体上，形成psl1180[Pser1IE1sv40]；所述启动子Pser1的上游酶切位点为SalI，下游酶切位点为BamHI，所述转录激活因子IE1的上游酶切位点为BamHI，下游酶切位点为NotI，所述转录中止信号sv40的上游酶切位点为NotI，下游酶切位点为HindIII；
B 重组载体的构建
将步骤A所得的psl1180[Pser1IE1sv40]用AscI酶切后，同经AscI酶切的转基因骨架载体pBac[3xp3-Redaf]的连接，得重组载体pBac[3xp3-Red,Pser1IE1sv40]。
8.权利要求1所述的转录激活因子IE1在家蚕中制备重组外源蛋白的应用。
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