[发明专利]一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法

说明书

技术领域

一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法，属于抗寄生虫药物技术领域。

背景技术

日本血吸虫病是一种危害人类健康，影响社会经济发展的重大传染病。吡喹酮是当前用于治疗日本血吸虫病的唯一商品化药物。长期大规模反复应用同一种抗虫药物往往会导致药物抗药性的产生，因此有必要建立现场监测和检测吡喹酮抗药性的技术。当前检测吡喹酮抗药性的主要方法是在疫区现场治疗病人，评估化疗结果，该方法时间长、病人依次性低，且存在漏查漏治现象。我们在实验室内建立了一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法，可方便、快速、敏感检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮的抗药性，解决了吡喹酮抗药性难以检测的技术难题，有利于现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法，解决现场监测和检测日本血吸虫吡喹酮抗药性的技术问题，快速、简便、敏感、可靠。

本发明的技术方案：一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法，取直径为5 cm的培养皿，先移入1 mL 含40～120只新孵出日本血吸虫毛蚴的水，后迅速加入1 mL吡喹酮药液，使培养皿内药液浓度分别为5×10^-7 mol/L及10^-7 mol/L，于1、3 min及5 min后滴加卢戈氏碘液，在解剖镜下观察其形态学变化，计算毛蚴变形率；实验重复6次，通过观察毛蚴形态变化率，检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮的抗药性。

所述毛蚴形态变化：在吡喹酮药液作用后，日本血吸虫毛蚴由正常情况下的卵圆形或椭圆形变成葫芦状或哑铃状。毛蚴变形率为变形的毛蚴数/毛蚴总数。

吡喹酮药液为吡喹酮溶于1％二甲基亚砜（DMSO）中配制成浓度为1×10^-3 mol/L与水稀释备用。

所述在解剖镜下观察其形态学变化，计算毛蚴变形率：实验重复6次，在经5×10^-7 mol/L吡喹酮溶液作用后，1 min毛蚴变形率< 50%，3 min毛蚴变形率< 70%，5 min毛蚴变形率< 90%；或经10^-7 mol/L吡喹酮溶液作用后，1 min毛蚴变形率< 10%，3 min毛蚴变形率< 20%，5 min毛蚴变形率< 30%，存在上述结果之一，即认为该日本血吸虫毛蚴对吡喹酮具有抗药性。

本发明的有益效果：一种体外检测日本血吸虫毛蚴对吡喹酮抗药性的方法，快速、简便、敏感、可靠，适合现场快速检测和监测日本血吸虫吡喹酮抗药性的产生，可解决日本血吸虫吡喹酮抗药性现场检测和监测的技术问题。

具体实施方式

实施例1：日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴对吡喹酮的敏感性测定

取2只直径为5 cm的培养皿，分别移入1 mL含40～120只新鲜孵出的日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴的水，后迅速加入1 mL吡喹酮药液，使培养皿内药液浓度为5×10^-7 mol/L，1 min后滴加卢戈氏碘液，在解剖镜下观察其形态学变化，计算敏感株和抗性株毛蚴变形率。实验重复6次。结果如表1所示。以所述含吸血虫毛蚴的水，但不加吡喹酮药液的样品作对照，毛蚴均呈卵圆形或椭圆形，不变形。

表1  吡喹酮对日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴形态变化的影响

实施例2：日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴对吡喹酮的敏感性测定

取2只直径为5 cm的培养皿，分别移入1 mL含40～120只新鲜孵出的日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴的水，后迅速加入1 mL吡喹酮药液，使培养皿内药液浓度分别为5×10^-7 mol/L，3 min后滴加卢戈氏碘液，在解剖镜下观察其形态学变化，计算敏感株和抗性株毛蚴变形率。实验重复6次。结果如表2所示。

表2  吡喹酮对日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴形态变化的影响

实施例3：日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴对吡喹酮的敏感性测定

取2只直径为5 cm的培养皿，分别移入1 mL含40～120只新鲜孵出的日本血吸虫吡喹酮敏感株和抗性株毛蚴的水，后迅速加入1 mL吡喹酮药液，使培养皿内药液浓度分别为5×10^-7 mol/L，5 min后滴加卢戈氏碘液，在解剖镜下观察其形态学变化，计算敏感株和抗性株毛蚴变形率。实验重复6次。结果如表3所示。