[发明专利]包括1081C＞A突变的CYP2C9基因片段、所编码的蛋白质片段及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及单碱基突变。更具体地，本发明涉及CYP2C9基因相对于SEQ ID NO.1的第1001位或SEQ ID NO.2的第1081位的突变位点，包含该突变位点的核酸片段及其相应编码的蛋白质片段。本发明还涉及鉴定所述突变位点的试剂和检测方法，以及鉴定该位点在指导用药中的应用。

背景技术

CYP2C9是细胞色素P450酶大家族CYP2C亚家族中最重要的一员，约占人肝微粒体CYP酶总量的20％。有大约10～16％临床常用药物经由CYP2C9氧化代谢，其中主要包括甲苯磺丁脲、S-华法林、苯妥英、格列吡嗪、格列苯脲、托拉噻咪、氯沙坦、厄贝沙坦和许多非甾体类抗炎药物(如：布洛芬、氯诺昔康、双氯芬酸和萘普生)等药物(参见参考文献1-5)。

CYP2C9基因具有高度多态性。目前为止，国际上已命名的等位基因共有35种(http://www.cypalleles.ki.se)，除去野生型(CYP2C9*1)外，共有34种突变类型可引起CYP2C9蛋白氨基酸组成发生改变，另外还有多种新发现的突变尚未被命名。研究较多且临床意义较大的突变类型主要包括以下10种：CYP2C9*2、*3、*5、*6、*8、*11、*12、*13、*14、*16，其中人种分布最广、研究最多、中国人群研究资料相对最丰富的突变型是CYP2C9*2(430C＞T)、CYP2C9*3(1075A＞C)(参见参考文献6-17、20)。

根据目前的临床研究显示，CYP2C9基因的这种多态性是造成CYP2C9酶活性在个体之间极大不同的主要原因，因此在携带不同CYP2C9基因型的个体间可引起药物疗效的极大差异，甚至产生严重的药物毒副作用或治疗不充分。因此，研究CYP2C9基因多态性对药物疗效的影响将对临床合理用药提供重要的科学依据(参见参考文献18、19、21、22)。

发明内容

本发明的目的是提供CYP2C9基因的新的单碱基突变位点，包含该突变位点的核酸片段、其编码的蛋白质片段及鉴定该突变位点在用药指导中的应用。

本发明的第一个方面是提供核酸片段，所述核酸片段包含对应于SEQ IDNO.1的第1001位的突变位点，且是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸，其中第1001位的核苷酸是A；或者所述核酸片段包含对应于SEQ ID NO.2的第1081位的突变位点，且是SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸，其中第1081位的核苷酸是A；或者为上述核酸片段的互补序列。

本发明的第二个方面是提供与含有对应于SEQ ID NO.1的第1001位或对应于SEQ ID NO.2的第1081位的突变位点的等位基因片段或其互补序列全部或部分杂交的等位基因特异性寡核苷酸，其中SEQ ID NO.1的第1001位或SEQ ID NO.2的第1081位的突变位点的核苷酸是A；所述等位基因片段是SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列中的至少10个连续核苷酸或其互补序列。

本发明的第三个方面是提供用于检测和/或分析单碱基突变的试剂盒，所述试剂盒包含本发明的核酸片段或等位基因特异性寡核苷酸，或包含SEQ IDNO.12和/或SEQ ID NO.13和/或SEQ ID NO.21所示的序列片段。

本发明的第四个方面是提供本发明的核酸片段或寡核苷酸在检测CYP2C9基因突变中的应用，其中所述核酸片段或寡核苷酸用作探针或引物。

本发明的第五个方面是提供一种用药指导，包括检测待测样品中CYP2C9基因的对应于SEQ ID NO.1的第1001位或SEQ ID NO.2的第1081位的单碱基突变；根据检测到的突变，调整由CYP2C9代谢的药物的给药量。

本发明的第六个方面是提供分析核酸的方法，所述方法包括分析待测样品中的包含对应于SEQ ID NO.1的序列的核酸中对应于第1001位的核苷酸或分析待测样品中的包含对应于SEQ ID NO.2的序列的核酸中对应于第1081位的核苷酸。

本发明的第七个方面是提供CYP2C9蛋白或其片段或变异体，所述蛋白序列为SEQ ID NO.3所示的序列；所述片段或变异体包含对应于SEQ ID NO.3的第361位的异亮氨酸，并且为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的至少10个连续氨基酸。