[发明专利]具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法

权利要求书

1.一种具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，包括以下步骤：

1）收集并种植籽粒外观为黄色或浅黄色的玉米，在适宜鲜食时期剥下完整籽粒并用小刀沿籽粒中缝纵切，选取胚乳全部为黄色或浅黄色的胚乳；然后提取皂化物备用；

2）采用紫外可见分光光度法，检测步骤1）所筛选的新鲜籽粒中的总类胡萝卜素含量；该方法采用检测波长为454nm；保留总类胡萝卜素含量10mg/kg以上的籽粒；

3）种植步骤2）筛选的籽粒，采用高效液相色谱法（HPLC法）对其新鲜玉米籽粒中玉米黄质含量进行定量分析；保留玉米黄质含量8mg/kg以上的材料。

2.根据权利要求1所述的具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，其特征在于，还包括了步骤4），继续种植扩繁步骤3）所选籽粒，筛选农艺性状好、配合力强的玉米品系，或以带有富含玉米黄质基因的玉米籽粒为供体，经杂交、回交或体细胞无性系变异获得的品系进行配组，筛选综合表现良好的品系，最终获得遗传稳定的富含玉米黄质的玉米自交系或杂交种。

3.根据权利要求1所述的具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，其特征在于，所述步骤1）中的玉米籽粒是玉米常规品种或杂交种亲本或种植资源或诱变产生的品系或自交系。

4.根据权利要求1所述的具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，其特征在于，所述步骤1）中的皂化物制取步骤如下：

a、取20g玉米籽粒磨碎，加丙酮提取液，抽滤，反复几次，直到提取液无色；

b、合并提取液，减压浓缩至干；浓缩时温度低于40度；

c、用少量甲醇溶解干燥的丙酮粗提物，然后加入等体积的30%（体积比）甲醇-KOH皂化4小时以上，得到皂化液；

d、减压浓缩皂化液到最小体积，加少量乙酸乙酯和正己烷等体积比配置的混合液（1：1=V/V）萃取，重复萃取多次，直到萃取液无色； 

e、 合并萃取液，在分液漏斗中用蒸馏水洗去皂化时的碱液，取上层萃取液减压浓缩至最小体积，得到类胡萝卜素提取物；

f、将浓缩好的类胡萝卜素提取物转移到1.5ml的离心管中，用N2气吹干剩余的溶剂，-20℃保存备用；

g、每样重复三次。

5.根据权利要求1所述的具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，其特征在于，所述紫外可见分光光度法具体为：称取0.1-0.2g皂化物，磨碎，加入5ml 正已烷:丙酮=3:2 (体积比)，暗条件下浸提16小时，中间摇动几次；然后加入1ml 20%（体积比） KOH-甲醇，暗条件下反应一个小时；再加入3ml正已烷和1ml 10wt%硫酸钠溶液，混匀后让其静止分层，上层黄色液体即为粗提的总类胡萝卜素溶液；以空白为对照，在紫外-可见分光光度计454nm处测定。

6.根据权利要求1所述的具有眼睛保健效果的鲜食型玉米的选育方法，其特征在于，所述高效液相检测法具体为：检测采用Waters的高效液相检测系统，其中检测器为2998型二极管阵列检测器，色谱柱为Spherisorb ODS2（5μm，250×4.6mm），流动相为乙腈：甲醇：二氯甲烷：正己烷=85：5：5：5（体积比），流速1ml/min；样品用1ml流动相溶解，过0.45μm的滤膜后进样，进样量10μl。