[发明专利]猪CD28受体，编码其的基因及其应用

说明书

技术领域

本发明属于动物基因工程领域，具体涉及猪CD28受体，编码其的基因及其应用。

背景技术

中国是一个猪肉生产和消费大国，然而目前猪瘟、繁殖和呼吸综合症(蓝耳病，PRRSV)等疫病严重流行是我国养猪行业面临的最大困难，因此疫病防控成为稳定和发展养猪业亟待解决的重大问题。然而，近年来猪病普遍呈现多病原交叉混合感染，猪的抗病能力和疫苗的防治效果明显降低。因此要做好疫病防控工作，需要寻找疫苗研发的新策略，或者寻求替代或辅助途径，如培育出具有抗病性的新品种猪。然而已有的研究成果多致力于利用特定疾病抗性基因培养单一抗病特性的家畜新品种。而这种策略显然与当前我国养猪业疫病多发的现实状况差距太大。因此，培育出具有广谱抗病性的新品种猪成为众多科研人员的理想。

适应性免疫应答反应在动物抵抗病原体侵袭过程中发挥着至关重要的作用。T细胞的活化更是该反应的重中之重。近年来的研究证明，T细胞的有效激活需要双信号刺激。一是MHC-抗原肽与TCR结合产生的第一信号，二是共刺激受体，主要是CD28与其配体结合产生的第二信号。在正常的机体微环境下，抗原递呈细胞递呈出来的抗原肽往往数量较少，其与TCR的结合不足以活化T细胞，容易造成T细胞反应无能。而T细胞共刺激受体CD28等提供的共刺激信号通路可以弥补较弱的TCR信号，从而激活T细胞。再者，当TCR与抗原肽的亲和不足时，往往难以活化T细胞，而足够的共刺激信号也能起到增强TCR信号通路的作用，从而激活T细胞。总之，足够的共刺激信号，既可以克服TCR占有率较少的问题，还可以弥补TCR亲和力的不足。因此共刺激受体介导的信号能增强适应性免疫系统功能，从而具备成为广谱抗病基因候选的潜能。

CD28受体作为共刺激受体中的典型代表，其基因序列信息和蛋白功能在人和小鼠的相关研究中，已有详尽的描述。CD28受体是公认的T细胞起始增殖及存活的主要共刺激分子。该受体与其配体B7.1(亦名CD80)或B7.2(亦名CD86)连接后，对T细胞的激活、增殖和存活都有明显的促进作用，而且可以影响T细胞的分化方向，并上调IFN-γ等细胞因子的表达。已有研究发现老年人T细胞表面的CD28分子表达水平明显下调，某些免疫系统激活滞后的病例也表现为CD28分子表达水平较低。因此，CD28分子的表达水平直接影响免疫系统的有效激活，进而影响生物个体的抗病能力。

CD28受体对T细胞免疫反应的建立、增强及其维持都具有重要作用，这预示着他们作为靶基因在转基因育种研究及应用中具有良好的前景。但是目前绝大多数共刺激分子相关研究都是基于基因敲除或者是利用抗CD28的单抗来除去或者增强共刺激信号的方式进行的。这些策略明显不适于育种研究。再者，猪的CD28受体目前只有预测的基因序列信息被公布，其确切的编码序列及其蛋白功能在此之前均未有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪CD28受体，编码其的基因及其应用。

为实现上述目的，本发明首先提供一种猪CD28受体，其为：由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

应当理解，本领域技术人员可根据本发明公开的氨基酸序列，在不影响其活性的前提下，取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸，得到所述蛋白的突变序列。因此，本发明猪CD28受体还包括由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由SEQ ID NO.2所示的蛋白质衍生的蛋白质。例如在非活性区段，将第181位的丝氨酸替换为苏氨酸，或是将第188位的谷氨酰胺缺失，或是在198位后面增加3个脯氨酸。

优选的，衍生蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的同源性可为70％以上，优选80％以上，更优选90％以上。

本发明还提供编码上述蛋白的基因。优选的，本发明提供的编码猪CD28受体的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

应理解，考虑到密码子的简并性以及不同物种密码子的偏爱性，本领域技术人员可以根据需要使用适合特定物种表达的密码子。

本发明还提供的含有猪CD28受体基因的载体、细胞系及宿主菌均属于本发明的保护范围。

本发明还提供所述的猪CD28受体在提高猪广谱抗病性中的应用。如通过制备抗猪CD28单抗来研制生物制剂，以口服或注射方式给药后，该单抗与CD28受体的结合可增强T细胞激活所需的第二信号，进而增强T细胞免疫反应，提高猪的抗病能力。