[发明专利]一种体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)细菌悬液的准备；

(2)实验动物的麻醉及背部肌肉感染；

(3)鉴定动物模型相关指标。

2.根据权利要求1所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：步骤(1)中细菌悬液由以下方法获得：将-80℃温度下保存的用于接解的细菌划哥伦比亚血平板，挑单菌落在培养基中37℃的温度下过夜培养；然后取菌液加入THB培养基，37℃摇床继续培养过夜，涂片检查为纯培养后，以1∶100接种摇菌培养4-6小时获得对数生长期的菌体，测定OD600值为08-1.0之间；将菌体清洗2-3遍后；调节细菌浓度为10⁶个/ml备用。

3.根据权利要求2所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：所述用于接种的细菌为猪链球菌临床分离株。

4.根据权利要求1-3中任一条所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：所述的实验动物为纯系斑马鱼。

5.根据权利要求1-3中任一条所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：实验动物的麻醉及背部肌肉感染为用浓度95μg/mL的三卡因间氨苯酸乙脂甲磺酸盐(MS-222)将斑马鱼麻醉；背部接种5×10⁴/鱼的细菌数量，对照组注射THB培养基，感染后24h，无菌采取背部感染的部位，将背部肌肉固定于2％的多聚甲醛中。

6.根据权利要求1所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：分别在感染24小时后将所述实验方法的斑马鱼处死，对斑马鱼相关指标进行鉴定。

7.根据权利要求1所述的体内细菌生物被膜感染动物模型的构建方法，其特征在于：所述的鉴定包括对背部肌肉甲醛固定制备组织切片，进行HE染色、革兰氏染色和扫描电镜(SEM)观察。