[发明专利]一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法无效

专利信息
申请号: 201110429048.0 申请日: 2011-12-20
公开(公告)号: CN102401833A 公开(公告)日: 2012-04-04
发明(设计)人: 苏胜彦;董在杰;张成锋;袁新华;徐跑 申请(专利权)人: 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心
主分类号: G01N33/68 分类号: G01N33/68
代理公司: 北京纽乐康知识产权代理事务所 11210 代理人: 覃莉
地址: 214081 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 雄性 不同 部位 肌肉 鉴别 背部 方法
【权利要求书】:

1.一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)提取雄鲤总RNA,用反转录试剂盒把RNA反转录成cDNA;

2)获得鲤鱼BMP4基因cDNA序列:根据斑马鱼BMP4基因序列Genbank 登录号AF402958设计引物序列:

上游引物为:F:5’- gatacccgaggaagggaaga-3’;

下游引物为:R:5’- ggggtgtggctgccgctaaa -3’;

获得鲤鱼的BMP4的cDNA,并根据上述cDNA对应氨基酸序列设计多肽,合成多肽,并对多肽进行修饰获得鲤鱼BMP4多肽,其氨基酸序列为:

QVLLGESSYASLIPEEGKc,其中c为增加的cys,用于多肽偶联;

3)用鲤鱼BMP4多肽免疫新西兰大白兔,制备兔抗BMP4血清;

4)用BMP4多肽对兔血清进行抗原亲和纯化,纯化后获得鲤鱼BMP4多克隆抗体,抗体进行ELISA效价检测,结果显示,ELISA Titer大于1:128000;

5)用鲤鱼BMP4多克隆抗体western技术检测雄鲤鱼背部、腹部和尾部肌肉中BMP4基因的表达,结果显示雄性鲤鱼背部肌肉中有BMP4蛋白的表达,而在其它肌肉中没有检测到BMP4蛋白的表达,这样就可以从雄性鲤鱼肉中鉴别出背部肌肉。

2.根据权利要求1所述的一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法,其特征在于:所述步骤2)中获得鲤鱼的BMP4基因序列为:CTGTCGAGACATCATGATTCCTGGTAATCGAATGCTGATGGTCATTTTATTATGCCAAGTCCTACTGGGAGAGAGCAGCTATGCTAGTCTAATACCCGAGGAAGGGAAGAAGAAAGCGTCGGCTCAGCACCTGGGTCAGAGTCATGAACTGCTGCGGGACTTTGAAGCCACGCTGCTGCACATGTTTGGGCTGCAGAGGCGACCGCGACCCAGCTACTCGGCTGTGGTGCCCCAGTATCTGCTGGACCTGTATCGCCTGCAGTCAGGGGAGGCCGAAGAGGCCGGGGCCCACGACGTGAGCTTCGATTATCCCGAAAGGTCCACGAGTCGAGCAAACACTGTGAGAGGATTCCATCACGAAGAGCACATGGAAGAGCTGCAGTCAGACGGCTCACCGGAGACTCCTCTGCGCTTCGTCTTCAATCTCAGCAGCATCCCAGAGGAGGAACTCATTTCTACTGCAGAGCTTCGTATCTACAGGCAACAGATAGATGATGCAATCTCAGATCCCCAACCCACGGGAGACGACGGTCTACACCGAATAAACATATACGAGGTGCTGAAGCCCCCGCGGGCCGGGCAGCTCATCACGCAGCTGCTGGACACTCGACTGGTGCGCCACAACACGACCCAATGGGAGAGCTTTGACGTGAGCTCAGCCGTACTGCGCTGGACCCGTGACAAGAGCTCCAATCACGGCCTGGCTGTGGAGGTGGTGCCCCTGAACCGAACCTCGCATCACCAGGGACGCCACGTACGCGTAAGTCGCTCCTTGCATCCGCTTCCAGATGCAGACTGGAGCCAGCTTCGCCCCCTGCTGGTCACGTTCGGGCATGACGGCAAAAGTCACCCACTGACGCGGCGAGCGAAACGCAGCCCGAAGCAAAGAGGTCGCAAGCGCAACCGAAACTGTCGGCGGCACGCGCTTTATGTGGACTTCAGCGACGTGGGCTGGAACGACTGGATCGTGGCGCCGCCCGGATATCAGGCGTACTACTgTCACGGGAGTGTCCCTTTCCATTAGCCGATCATCTCAACTCCACCAATCACGCTATCGTACAGACACTGGTGAACTCGGTGAACACCAATATCCCCAAAGCCTGCTGCGTGCCCACTGAGCTCAGCGCAATCTCCATGCTTTACCTGGACGAAACGGACAGGGTGGTGCTGAAAAACTATCAGGAGATGGTGGTCGAGGGGTGTGGCTGCCGCTAAA;根据鲤鱼BMP4基因的氨基酸序列为:MDDYHLFCASCRKTGKKQTTMRSLIHSFFILSLFMVASPVRTGETLCGGELVDTLQFVCGADGFYISRPNRSNSRRPQKGIVEECCFRSCELRLLQQYCAKPVKSERDVSSSLLQAFPVSQALHKDITGGPPGVKYSKYEVWQRKPAQRLRRGVPSILLARKFRRQVEKIQDEEQVSFHRPLMTLPNGHPAILPHIQINVSHK。

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