[发明专利]miR-1在制备治疗原发性青光眼制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于眼病治疗药物领域，尤其是一种miR-1在制备治疗原发性青光眼制剂中的应用。

背景技术

原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma，POAG)是常见的致盲性眼病之一，以进行性视神经损害和视野缺损为特征，迄今为止，其发病机制尚未完全清楚，限制了治疗手段的发展。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约22nt，对细胞内基因表达进行转录后调控的高度保守的非编码单链RNA分子。成熟的miRNA可以作为一种引导性分子，依据碱基互补配对原则，与靶mRNA结合而在转录后水平引起靶mRNA的剪切或翻译抑制。目前的研究表明，miRNA不仅参与生物体的正常发育，在疾病的发生和发展中也起着极为重要的作用。miRNA的发现和运用，为人类了解疾病的发生机制提供了新的线索，并为治疗疾病提供新的手段。

原发性开角型青光眼的发病原因可能与小梁网细胞从小梁支架上的脱落、丢失有关，而小梁细胞的脱落、丢失等异常改变则可能会阻塞小梁网网眼，影响房水流出通道的通畅性。目前有研究发现原发性开角型青光眼患者小梁网组织中纤维连接蛋白(FN)积聚过多，提示这也可能是网发病原因。

发明内容

本发明的目的在于提供一种miR-1在制备治疗原发性青光眼制剂中的应用，本发明通过miR-1(microRNA-1)在氧化应激下的人眼小梁网细胞中的表达水平，miR-1对细胞增殖、粘附、迁移功能的调节作用，以及使用miR-1抑制细胞中纤维连接蛋白(FN)的表达水平来确定miR-1对原发性青光眼的影响，进一步确定miR-1在制备治疗原发性青光眼制剂中的应用。

本发明实现目的的技术方案如下：

miR-1在制备治疗原发性青光眼制剂中的应用。

miR-1在制备抑制人眼小梁网细胞细胞增殖试剂中的应用。

miR-1在制备抑制人眼小梁网细胞细胞粘附试剂中的应用。

miR-1在制备增强人眼小梁网细胞的迁移能力的试剂中的应用。

miR-1在制备抑制人眼小梁网细胞中纤维连接蛋白的表达水平的试剂中的应用。

本发明的优点和积极效果如下：

1、本发明通过上调miR-1，降低小梁网细胞增殖和粘附功能，从而减少细胞脱落；增强其迁移活性，从而降低脱落的细胞阻塞小梁网网眼的几率；降低小梁网细胞中FN的表达水平，减少小梁网基质的异常沉积，增加房水的回流，降低眼压，从而减少高眼压对视神经的损害，这对于POAG的治疗具有重要意义。

2、本发明在观察氧化应激状态下的小梁网细胞中miR-1的表达情况的基础上，证明了miR-1对小梁网细胞增殖、迁移、粘附功能的调节作用，并进一步确定了miR-1直接靶定FN，确定了miR-1对POAG的治疗价值。

附图说明

图1为本发明在氧化应激状态下的小梁网细胞中，miR-1的表达水平下调；

图2为本发明转染pcDNA3/pri-miR-1质粒后，miR-1成熟体在小梁网细胞中的表达水平显著上调；

图3为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，MTT实验显示细胞增殖能力下降；

图4为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，MTT粘附力实验显示细胞粘附能力下降；

图5为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，划痕实验显示细胞迁移能力显著增强，其中图5-1至5-4分别为0小时、12小时、24小时、36小时；

图6为本发明双荧光报告基因实验显示在小梁网细胞中miR-1直接靶定FN，图中的“+”表示添加该质粒，“-”表示未添加该质粒，对应的柱状图的值；

图7为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，FN的mRNA表达水平降低；

图8为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，FN的蛋白表达水平降低电泳图；

图9为本发明在小梁网细胞中上调miR-1后，FN的蛋白表达水平降低柱状图。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。