[发明专利]一种制备牛胆结石的方法

说明书

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及一种中药原料药的制造方法，尤其涉及一种制备牛胆结石的方法。

背景技术

牛胆结石即牛黄，是珍贵的中药材。它具有清心、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒等功效。我国许多名贵中成药，如：安宫牛黄丸、六神丸等均以牛黄为主药配制而成。但是牛体内自然成石率仅为1~2%，因此，药用资源非常稀缺，价格昂贵，依赖进口，不仅花费了大量的外汇，而且也制约了我国传统医药工业的发展。

1956年以来，我国的医药工作者积极从事人工牛黄的研究，1971年人工牛黄应用于中成药组方中，部分缓解了天然牛黄的供需矛盾。但这种人工牛黄主要是胆酸、猪去氧胆酸和极微量的胆红素以及大量淀粉研末过筛而得的粉末，不是牛胆结石，其成份、结构、含量及已知各种微量成份均与天然牛黄相差太远，不具备天然牛黄的性状、结构、成份、含量特征，临床疗效远不及天然牛黄。

上世纪70年代以来，我国云南、广东、内蒙等地的医药工作者，在活牛胆囊内培植牛黄的实验研究获得了成功。但需对牛体进行剖腹手术并且该手术比较复杂，而且2~3年才能剖腹取出尼龙丝网，刮下棕黄色附着物。成石率低，产量小，胆红素含量低，质量不稳定。而且，此产品并不是牛胆结石，而是沉积在尼龙丝网上的棕黄色胆色素钙颗粒及粘液刮下干燥后所形成的粉末。也不可能规模化生产。

上世纪70年代初，武汉同济医科大学附属同济医院肝胆外科蔡红娇医师在对人类胆结石形成的原因和机理进行研究并获得成功的基础上，进一步用此原理进行牛胆囊胆汁内培育牛胆结石的研究，取得了成功并于1989年申报了“一种人工体外制作牛胆结石的方法”的发明专利（申请号89100505.6）。利用该方法制作的牛胆结石，其外观、结构、成份、含量与天然牛黄基本相同。但是限于当时的条件，特别是1985版《中国药典》对牛黄的胆酸、胆红素含量未作规定，因此，其制成的牛胆结石的胆红素、胆酸等含量较低。不仅如此，上述方法除配方的牛胆汁之外，制备胆红素钙，多用猪胆汁代替，胆汁未经细菌发酵即可以成石。因此，其制成的牛胆结石却含有猪去氧胆酸。中国药典1990年版一部明确规定：牛黄是牛胆结石，含胆红素35%以上，胆酸6%以上，并规定了相应的鉴别和检测方法。因此用上述方法制成的牛胆结石不能满足新的《中国药典》对牛胆结石规定的药用要求。

2000年，由武汉大鹏药业有限公司组织科研人员在ZL89100505.6发明专利的基础上，根据1990年版《中国药典》要求，研制了一种新的在牛体外制备牛胆结石（即体外培育牛黄）的方法。该方法既适应规模化生产要求，生产出的产品又能满足新的《中国药典》要求。并于2001年申报了专利（申请号01133550.5）。该方法是在牛胆汁加入一定量的大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或其组合菌液，对牛胆汁进行细菌发酵处理。再利用发酵牛胆汁和澄清饱和钙盐溶液制取有效成份的沉淀物，然后根据药用要求加入适量的胆红素、胆酸、去氧胆酸和无机盐后，制作复合胆红素钙。再利用复合胆红素钙和发酵牛胆汁在体外培育牛胆结石。由于现在生产规模不断扩大，原方法中的有效成份容易分解，自然干燥方式周期太长，已不能适应更大规模的工业化生产要求。

发明内容

本发明是在ZL01133550.5发明专利的基础上，根据更大规模的工业化生产要求和成本控制原则而研发的一种生产周期更短，效率更高的在牛体外制作牛胆结石（即体外培育牛黄）的方法。

本发明的技术方案如下：

1、制备发酵牛胆汁

(1)调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3~7%（g/ml），使其达到药用要求；

(2)牛胆汁入罐后利用蒸汽进行灭菌处理，然后按每10000ml牛胆汁接种100~500ml菌液的比例，将大肠杆菌、变形杆菌或肠球菌的单一菌液或其组合菌液接种到牛胆汁中，进行发酵处理；

（3）发酵完成后利用蒸汽对发酵液进行灭活处理。

2、利用发酵牛胆汁制备复合胆红素钙

（1）取1000~4000ml纯化水加入20~40g氧化钙，搅拌，即得饱和氧化钙溶液。

（2）取出定量的发酵牛胆汁，每1000ml加入1000~4000ml饱和氧化钙溶液以及5~15g焦亚硫酸钠，对其进行搅拌、加热至沸腾，滤取棕红色沉淀物；

（3）在棕红色沉淀物中，加入适量的水进行搅拌、洗涤，静置后滤去上清液，以除去水溶性杂质，再向沉淀中加入总重量35~55%的胆红素、5~15%的胆酸、2.5~7.5%的去氧胆酸、0.3~0.6%的硫酸锌、0.3~0.6%的硫酸镁后，搅拌混匀；

（4）冷冻后低温真空干燥；