[发明专利]具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因及其制备方法。

背景技术

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一 ,其发病率和死亡率均居我国恶性肿瘤的前二位。胃癌因缺乏特异性的初筛指标以及早期患者症状不明显，因此早期胃癌很难发现，大部分胃癌患者就诊时已进入进展期。目前，尽管采用手术、化疗和放疗等综合措施治疗胃癌, 但总体疗效仍欠理想。随着胃癌分子生物学研究的不断深入, 针对肿瘤细胞生长、凋亡、细胞周期、侵袭浸润以及血管生成等分子生物靶点提出的分子靶向治疗成为胃癌综合治疗的重点和热点。

信号转导和转录活化因子(signal transducers and activators of transcription，Stats)家族是一种存在于胞浆，并在激活后能够转入核内与DNA结合的蛋白家族，具有信号转导和转录调控的双重功能。Stat5作为该家族的成员之一，它涉及到由细胞因子，激素和生长因子所介导的各类信号转导过程，参与了细胞生长、分化、凋亡等多种生理功能的调控，并与造血功能、免疫反应以及肿瘤的发生和发展关系密切。

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是由双链 RNA（double stranded RNA, dsRNA）介导的序列特异性转录后基因沉默（post transcriptional gene silencing , PTGS）的过程，通过反义链与正义链形成双链RNA，特异性地抑制靶基因的表达，即通过人为地引入与内源靶基因具有相同序列的双链RNA（正义RNA和反义RNA），从而诱导内源靶基因的mRNA降解，达到阻止基因表达的目的。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因。

本发明的目的之二在于提供该基因的制备方法。

本发明的目的之三在于提供该基因在制备抑制胃癌细胞增殖药物中的应用。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因，其特征在于该基因为SEQ NO.1所示的碱基序列。

一种制备上述的具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因的方法，其特征在于该方法的具体步骤为：根据SilenCircle ^TM RNAi 转录试剂盒中载体设计的具体要求，设计对应于Stat5基因中GGCG TTA TAT GGC CAG CAT AC核心序列的shRNA的两条部分互补的寡核苷酸序列进行合成，即得到具有抑制胃癌细胞BGC-823增殖功能的基因；所述的两条互补寡核苷酸序列为：

Sense： 5'-ACA CCG GCG TTA TAT GGC CAG CAT TCT TGC TTG AAG AAT GCT GGC CAT ATA ACG CCT-3’

Anti-sense:： 5'-AAA AAG GCG TTA TAT GGC CAG CAT TCT TCA AGC AAG AAT GCT GGC CAT ATA ACG CCG -3’

其中GGCG TTA TAT GGC CAG CAT AC为与Stat5b基因进行互补配对的序列。

上述的具有抑制胃癌细胞增殖功能的基因在制备抑制胃癌细胞增殖药物中的应用。

本发明设计对与胃癌细胞BGC-823增殖有关联的基因的RNAi，并应用胃癌细胞BGC-823模型研究其对胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用。为RNAi在胃癌治疗应用提供了一种新方法。

附图说明

图1为shRNA的寡核苷酸序列引物和P^SilenCircle质粒的连接图。

图2为实验分组与检测指标  未转染对照组数据对比图。

具体实施方式

1.胃癌细胞BGC-823的培养：将长满细胞的培养皿中培养基吸出,加2ml无菌1×D-Hanks洗涤两次,弃去洗涤液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均匀覆盖细胞表面,消化时间约1-3分钟。消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆,边缘折光性增强,在细胞尚未脱落时倒掉消化液,立即加入血清或含血清的培养基,终止消化。将培养瓶壁上的细胞吹打下来, 1000 rpm/分钟，离心5分钟,弃去培养基,加入含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀, 视细胞密度以1:2或1:3分皿培养,当细胞长满培养瓶且形成致密单层时即可再传代。