[发明专利]制造酰肼的改良方法

说明书

本申请是申请号为200820021652.6、申请日为2008年5月20日、发明名称为制造酰肼的改良方法的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及自肼及酰基氯制备酰肼的改良合成方法。所述酰肼产物具有可用于将卡奇霉素连接至单克隆抗体的经保护硫醇基团。

背景技术

麦罗塔(吉妥单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin))也称为CMA-676或仅CMA，其由通过酸可水解连接体与卡奇霉素结合的抗CD33的单克隆抗体组成。当经衍生化的卡奇霉素与DNA小沟结合时，其干扰DNA进展并最终造成癌细胞死亡。所述市售产品以麦罗名称作为靶向第一抗体的化学治疗剂出售，且当前已批准用于治疗老年患者的急性髓性白血病(AML)。

统称为卡奇霉素或LL-E33288复合物的抗菌及抗肿瘤剂强效家族成员阐述于美国专利第4,970,198号；第4,939,244号及第5,079,233号中。所述家族成员可用于与作为载体的单克隆抗体形成治疗有用的免疫偶联物。抗体可为抗-CD33抗体(例如，hp67.6)、抗-CD22抗体(例如，G544)、抗-路易斯Y抗体(anti-Lewis Y antibody)(例如，G193)、抗-5T4抗体(例如，H8)或抗-CD20抗体(例如，利妥昔单抗(rituximab))。卡奇霉素家族成员优选为N-酰基卡奇霉素，更优选为N-乙酰基γ卡奇霉素。卡奇霉素家族成员含有甲基三硫醚，其可与合适硫醇反应形成二硫醚，同时引入可用于将卡奇霉素衍生物连接至载体的酰肼官能团。所述与卡奇霉素的反应的实例在美国专利第5,053,394号中给出。所述卡奇霉素酰肼衍生物经由形成腙而连接至单克隆抗体。例如，将药物的酰肼衍生物连接至氧化抗体的一般方法阐述于麦克恩(T.J.McKearn)等人，美国专利第4,671,958号中。美国专利第5,770,701号涉及制备目标形式的LL-E33288复合物的二硫醚化合物的方法。使连接体4-(4-乙酰基-苯氧基)丁酸与卡奇霉素酰肼衍生物(优选为卡奇霉素N-乙酰基γ二甲基酰肼)缩合以提供羧酸腙，所述羧酸腙用N-羟基琥珀酰亚胺进一步处理，得到准备用以与所选生物大分子偶联的OSu酯(N-琥珀酰亚胺基氧基)。卡奇霉素含有通过造成双链DNA断裂的-S-S-键结还原而激活的烯二炔弹头。因此，其中酰基含有巯基官能团的经单酰基化的肼可用于将卡奇霉素连接至单克隆抗体。3-甲基-3-巯基丁酸酰肼(也称为DMH连接体或CL-332258)是用于将卡奇霉素连接至单克隆抗体以制造(例如)吉妥单抗奥佐米星或伊妥单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)的优选含巯基N-酰肼。随后将经衍生化的卡奇霉素激活以与经人源化的单克隆抗体偶联得到CMA-676。当前，DMH连接体可通过5步反应方法经由中间体对-甲氧基苄基硫醚酰肼5制备。(化学方程式I-V)。在于USA实施的本制造过程中，对-甲氧基-苄基硫醇与3，3-二甲基丙烯酸的迈克尔加成(Michael addition)是经哌啶辅助(化学方程式I)。

化学方程式I

所得硫醚酸(1)与草酰氯在二氯甲烷中反应形成对-甲氧基苄基硫醚酰氯(2)(化学方程式II)。

化学方程式II

在低温(-70℃)下将酰氯(2)缓慢添加至肼/二氯甲烷(比率为约28％，v/v)的混合物中。以约74％产率形成对应的对-甲氧基苄基硫醚酰肼(3)(化学方程式III)：

化学方程式III

然而，期望产物对-甲氧基苄基硫醚酰肼(3)通常含有约20％的不期望副产物双甲氧基苄基硫醚酰肼(参见下文化学方程式VI)。在酸性条件下移除苄基保护基团(化学方程式IV)，随后酸盐中和及纯化(化学方程式V)，以45％产率提供3-甲基-3-巯基丁酸酰肼(5)。

化学方程式IV

化学方程式V

不期望副产物双甲氧基苄基硫醚酰肼(6)是自产物对-甲氧基苄基硫醚酰肼与起始材料对-甲氧基苄基硫醚酰氯的反应产生(化学方程式VI)。所述副产物产生导致产率及质量较低。

化学方程式VI

使用原始方法程序，产生约20％的量的双甲氧基苄基硫醚酰肼(6)。显然，自化学方程式III存在所述含量或更高含量的不期望副产物非我们所乐见。本发明阐述克服此问题并使不期望副产物的产率降低的技术。

发明内容