[发明专利]聚乙二醇缀合的艾塞那肽的合成及应用

权利要求书

1.一种聚乙二醇缀合的艾塞那肽，由结构通式（Ⅰ）表示：

（Ⅰ）

式中，mPEG表示甲氧基聚乙二醇的残基；

n取值为0-3；

R表示去除一个氨基的艾塞那肽分子，其中，所述氨基为艾塞那肽分子中赖氨酸残基的氨基或N末端组氨酸残基的氨基；

所述聚乙二醇缀合的艾塞那肽的分子量为9800-110000。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽，其特征在于n取值为1。

3.根据权利要求1所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽，其特征在于聚乙二醇缀合的艾塞那肽的分子量为9800-15000。

4.权利要求1-3任意一项所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽的制备方法，包括以下反应：

具体地，反应过程包括以下步骤：

（1）将艾塞那肽（Ⅲ）用Tris-HCl缓冲液溶解，调节其pH为6.5-8.5；

（2）加入活化的化合物（Ⅱ），其中，艾塞那肽（Ⅲ）与化合物（Ⅱ）的摩尔比为 1：0.1-100，反应时间为20-240分钟，反应的温度为0-37℃；

（3）反应完毕，加入超过反应物摩尔量100倍以上的甘氨酸终止反应，制得聚乙二醇缀合的艾塞那肽（Ⅰ）。

5.根据权利要求4所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述聚乙二醇缀合的艾塞那肽（Ⅰ）的分离纯化和分析，包括以下步骤：

（1）聚乙二醇缀合的艾塞那肽（Ⅰ）的分离纯化：

将最终反应液过滤，以反相高效液相色谱进行纯化，色谱条件如下：

色谱柱： 10um，20 x 250mm

流动相： A： 0.1% 三氟乙酸

              B： 乙腈

              35%B 等度洗脱

流速： 20ml/min

检测波长：210nm

以上述条件运行，通过峰值进行分离纯化；

（2）聚乙二醇缀合的艾塞那肽（Ⅰ）的分析：

将上步分离纯化以后的目标产物用高效液相色谱进行分析，色谱条件如下：

色谱柱： 5um，4.6 x 250mm

流动相： A： 0.1%的三氟乙酸

              B： 乙腈

              30%-40%B 10分钟内梯度洗脱，然后用95%B冲洗

流速：1ml/min

检测波长：210nm

柱温：35℃

以上述条件运行，通过峰值进行分析。

6.根据权利要求4所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽的制备方法，其特征在于，化合物（Ⅱ）为丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯1000、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯2000、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯5000、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯10000、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯20000、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯30000、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯1000、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯2000、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯5000、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯10000、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯20000或丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯30000中的一种。

7.根据权利要求4所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述pH为 6.5-7.5；步骤（2）所述摩尔比为1：8-10，所述反应时间为20-30分钟，所述反应温度为20-25℃。

8.权利要求1-3任意一项所述的聚乙二醇缀合的艾塞那肽在制备治疗2型糖尿病的药物中的应用。