[发明专利]小RNA has-miR-373抑制剂的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及药物设计方面。 

背景技术

has-miR-373是一种长度为18～25核苷酸单链的内源性非编码性小RNA。它主要通过与靶标基因3′非翻译区的完全或不完全配对，抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生命活动。在病理条件下，microRNA可通过调控其靶标基因及其参与的信号通路，影响肿瘤的发生和发展，发挥着类似于癌基因或抑癌基因的功能。实验表明在很多肿瘤中，一些类型的microRNA是高表达的，这些高表达的microRNA与肿瘤的侵入性、转移性等有一定的相关性。这些microRNA为肿瘤诊断和治疗提供了新的策略。 

目前抑制microRNA功能的普遍方法是采用反义抑制的原理。实验证明，与成熟体microRNA完全互补或与前体microRNA一些区域互补的经过修饰的RNA可以有效的抑制microRNA功能。一些体内实验证明，这种抑制RNA通过体内注射也有效果。因此具有一定的临床应用价值。 

然而，反义抑制方法存在体内给药困难的问题。目前的各种向体内运送RNA方法，包括化学转染试剂以及病毒载体等，都存在效率和安全性问题，因此一直无法达到临床应用的要求。而传统的小分子化合物药物则在给药方面存在明显的优势，或注射或口服，简单有效。因此我们认为小分子化合物抑制剂将比传统的反义抑制RNA更有潜 力成为靶向microRNA的药物。 

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选抑制has-miR-373活性的小分子化合物的方法。适用于由has-miR-373高表达引发的诸如恶性肿瘤，糖尿病等疾病的药物设计。 

本发明是这样实现的，主要包括如下流程：步骤1，has-miR-373前体序列三维结构模型的构建及优化；步骤2，小分子化合物三维结构的获得；步骤3，分子对接；步骤4，过滤非特异性结合化合物。 

该发明的优点在于：利用计算机进行虚拟筛选，相比于传统方法，省时省力；基于结构筛选的has-miR-373抑制剂可以保证抑制剂的特异性，抑制剂只对单一的has-miR-373起抑制作用，而不影响其他的microRNA。开发的小分子药物在给药过程中无须转染试剂，注射或口服均可，简单有效。 

附图说明

图1是本发明所述的has-miR-373抑制剂筛选的方法的流程图。 

具体实施方式

参图1所示，本发明所述的方法中，主要流程为： 

步骤1，microRNA前体序列三维结构模型的构建及优化； 

步骤2，小分子化合物的获得； 

步骤3，分子对接； 

步骤4，过滤非特异性结合化合物 

下面做具体的说明： 

步骤1.首先从Sanger数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)获得has-miR-373前体的序列，序列三级结构模型由MC-SYM软件(http://www.major.iric.ca/MC-Pipeline/)获得，并对获得的三维结构模型使用TINKER软件包(http://dasher.wustl.edu/tinker/)进行能量优化。 

步骤2.小分子化合物的获得。通过筛选NCI数据库(http://dtp.nci.nih.gov)，筛选出2000个具有成药潜能的化合物，并获得这2000个小分子化合物数据的三维结构模型。 

步骤3.分子对接。利用AutoGrid4和AutoDock4(http://autodock.scripps.edu/)软件执行microRNA前体与小分子化合物的分子对接。 

步骤4.过滤非特异结合化合物。考虑到有的化合物可能对双链核糖核酸具有非特异的结合，需要将这部分化合物从结果中剔除。方法是随机产生一段双链核糖核酸序列，重复步骤1-3，将得到的化合物从结果中剔除。 

本方法的特征： 

该方法采用构建三维结构模型的方法来筛选能够与目标microRNA has-miR-373结合的小分子化合物，相比于常规方法中采 用大规模，盲目的筛选，具有更加方便，经济，高效的特点。另外，本方法针对特定的microRNA has-miR-373，可以找到特异的小分子化合物，从而为后续的靶向药物设计提供了准确的依据。