[发明专利]检测混合物中山羊角成分的方法及所用引物有效

专利信息
申请号: 201110438771.5 申请日: 2011-12-23
公开(公告)号: CN102424844A 公开(公告)日: 2012-04-25
发明(设计)人: 李志猛;曹梦;姚璐;彭鹏;张晓楠;张丽娟 申请(专利权)人: 北京同仁堂股份有限公司;北京同仁堂科技发展股份有限公司;北京中研同仁堂医药研发有限公司
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12N15/11
代理公司: 北京三友知识产权代理有限公司 11127 代理人: 韩蕾
地址: 100176 北京*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 检测 混合物 中山 羊角 成分 方法 所用 引物
【权利要求书】:

1.一种检测混合物中山羊角成分的方法,该方法主要包括:

从待测混合物中提取总DNA;

以所提取的总DNA为模板,利用特异性引物进行PCR扩增;所述特异性引物为选自:SEQ ID Nos.1和2、SEQ ID Nos.3和4、以及SEQ ID Nos.5和6中的一对、两对或三对引物;

对上述扩增结果进行分析判断。

2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述从待测混合物中提取总DNA的过程包括如下步骤:

待测混合物经煮沸法处理20~40分钟;

加入CTAB提取缓冲液60℃~70℃消化2~4小时;

用酚仿法抽提;

加入异丙醇沉淀富集DNA;

利用PCR纯化试剂盒进行纯化,得到所提取的总DNA。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中,所述PCR扩增反应条件如下:

反应体系为15μl,其中10×PCR缓冲液1~5.5μl,dNTPs(2.5mM)0.5~1.8μl,上下游引物(10μM)各0.5~1.5μl,Taq DNA聚合酶(5U/μl)0.2~1.2μl,DNA模板(50ng/μl)0.8~3μl,无菌超纯水补至15μl;

扩增条件:95℃预变性5min;95℃变性30s,48~68℃退火30s,72℃延伸30s,35~40个循环;最后72℃延伸7~10min;

优选地,所述SEQ ID Nos.1和2的退火温度为52℃,所述SEQ ID Nos.3和4的退火温度为50℃,所述SEQ ID Nos.5和6的退火温度为58℃。

4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述对上述扩增结果进行分析判断的过程包括用凝胶电泳显示所述扩增的产物。

5.根据权利要求1所述的方法,其中,所述待测混合物为需要鉴别是否为山羊角的药材、或者以山羊角或替代品入药的中药制剂。

6.根据权利要求1所述的方法,该方法还包括:

将待测混合物样品的扩增结果与从山羊角中提取DNA进行PCR扩增的结果进行对照,分析判断所测混合物中是否存在山羊角成分。

7.根据权利要求1或6所述的方法,其中,以SEQ ID Nos.1和2、SEQ ID Nos.3和4、以及SEQ ID Nos.5和6分别进行PCR扩增,扩增出一个、二个或三个相应的目的片段,则所测混合物中存在山羊角成分。

8.用于实现权利要求1~7任一项所述检测混合物中山羊角成分的方法的引物,该引物包括选自:SEQ ID Nos.1和2、SEQ ID Nos.3和4、以及SEQ ID Nos.5和6中的一对、两对或三对引物。

9.权利要求8所述的引物在检测混合物中是否存在山羊角成分中的应用;优选地,所述待测混合物为需要鉴别是否为山羊角的药材、或者以山羊角或替代品入药的中药制剂。

10.一种检测混合物中山羊角成分的试剂盒,该试剂盒包含权利要求8所述的引物,优选还进一步包括PCR缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶。

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