[发明专利]一种牡丹皮提取物及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，具体地涉及一种中药提取物及其制备方法和用途，特别是涉及一种牡丹皮提取物及其制备方法，该提取物可用于抗病毒。

背景技术

牡丹皮又名丹皮、粉丹皮，为毛茛科芍药属植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。始载于《神农本草经》，现收录于《中国药典》，性微寒，味苦、辛，归心、肝、肾。具有清热解毒，活血化瘀之功效。用于治疗温毒发斑，吐血衄血，夜热早凉，无汗骨蒸，经闭痛经，痈肿疮毒，跌打伤痛等。

牡丹皮的主要化学成分包括丹皮酚及其苷类、芍药苷及其苷类、三萜、甾醇等。近年来国内外学者对该植物的药理活性研究发现其在治疗心脑血管疾病、抗菌、消炎、抗肿瘤、治疗皮肤病等方面有很好的功效，具有增强免疫、降血糖、保肝、镇痛、镇静、抗惊厥等作用，显示该植物具有很大的药用前景。

GRP78是位于内质网(endoplasmic reticulum，ER)的分子量78KDa的分子伴侣，全称为葡萄糖调节蛋白78(78-kDa glucose-regulated protein)，又被称为Bip(免疫球蛋白结合蛋白)。具有钙离子结合能力及保护子功能，对于折叠、成熟、转运蛋白质到细胞外有重要的作用，使蛋白质具有正确的功能和结构。已知在短暂高温、缺氧、低温、高糖、辐射等ER压力下，未折叠或非正常折叠蛋白质蓄积于ER内，会诱导GRP78的表达。通过GRP78过量表达实验或反义抑制实验发现，GRP78与针对ER压力引起的细胞死亡的防御反应有关(Lee AS.Trends Biochem Sci.2001，26：504-10)。

据报道，数种病毒诱导UPR(未折叠蛋白反应，unfolded protein response)伴随GRP78表达上调及细胞死亡，包括：乙肝病毒(Xu Z.J Virol.1997，71(10)：7387-92)、丙肝病毒(Tardif，K.D.et al.J.Virol.76：7453-7459)、疱疹病毒(Mao，H.Virus Research.2001，76(2)：127-135)、登革热病毒(S Wati et al.Journal of Virology.2009，83：12871-12880)、人巨细胞病毒(Nicholas J.Buchkovich.Journal of Virology.2008，82：31-39)、日本脑炎病毒(Su H.L.et al.J.Virol.76：4162-4171)及很大程度依赖内质网正确折叠及装配的病毒(S Wati et al.Journal of Virology.2009，83：12871-12880)。

研究显示，GRP78利用其分子伴侣功能折叠装配病毒蛋白。GRP78与病毒的核心蛋白有结合反应，提示GRP78参与了蛋白质包被核酸的过程(He B.Cell Death Differ 2006，13(3)：393-403)。

GRP78裂解剂SubAB可以使GRP78几乎消失，不影响病毒蛋白的合成，但可以阻断病毒颗粒的形成，提示控制GRP78的表达可达到影响病毒颗粒装配及向外释放的目的(Nicholas J.Buchkovich.Journal of Virology.2008，82：31-39)。

用GRP78抗体处理也可以降低病毒进入细胞的蛋白G结合，并减少感染(Honda et al.J.Virol.2009，83：12622-12625)。

有研究表明，苎麻提取物降低了乙肝病毒引起的GRP78上调，结果病毒蛋白质合成未受影响，但病毒颗粒分泌下降(Huang KL.J Viral Hepat.2009，16：367-375.)。

这些都提示了一个新的抗病毒途径：抑制GRP78的表达以提供一个影响病毒装配的目标，该途径可能不易发展耐药性。

目前，尚未发现关于牡丹皮提取物作用于GRP78而影响病毒分泌方面的报道。

发明内容

发明人在利用中国专利ZL01121114.8的草药芯片筛选可与GRP78结合的草药活性成分时，惊讶地发现在牡丹皮提取物中存在有一系列活性成分能专一地与GRP78结合并抑制GRP78的活性。进一步经由体外实验，本发明人惊讶的发现牡丹皮提取物对乙肝病毒的分泌有明显的抑制作用并且显示极低的细胞毒性。

为此，本发明提供一种牡丹皮提取物及其制备方法，以及该牡丹皮提取物用于制备抗病毒药物的用途。