[发明专利]毒死蜱半抗原、毒死蜱完全抗原及其制备方法

权利要求书

1.一种毒死蜱半抗原，具有式I结构：

2.式I所示毒死蜱半抗原的制备方法，由如下步骤组成：

向圆底三口瓶中加入50mL含1.20g的3-巯基丙酸无水乙醇溶液、1.04gNaOH，加热搅拌至NaOH完全溶解，加入50mL毒死蜱(3.51g)无水乙醇溶液，60℃搅拌反应1.5h，反应完毕后，趁热过滤反应混合物，滤液减压浓缩蒸干得白色固体，加入50mL 5％NaHCO₃溶液溶解并转移至分液漏斗中，30mL正己烷萃取，弃去有机相；浓盐酸调节水相pH＝3，二氯甲烷萃取，收集有机相并用无水Na₂SO₄干燥过夜，减压浓缩近干得淡黄色固体，利用硅胶柱分离纯化，洗脱液为正己烷/乙酸乙酯＝1/2，收集目标物，减压浓缩蒸干得淡黄色固体，-20℃氮气保护下密封保存。

3.一种毒死蜱完全抗原，具有式II结构：

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4.式II结构的一种毒死蜱完全抗原的制备方法，由如下步骤组成：20.0mg羧基化毒死蜱半抗原，9.2mgEDC和5.6mg NHS溶于400μL无水DMF，室温搅拌12h，4000rpm离心5min，收集上清液；取200μL上清液，加入2.7mL 10mg/mL BSA硼酸盐缓冲液(0.2M，pH＝9.0)中，室温500rpm搅拌4h；另取200μL上清液，加入1.2mL 15mg/mL OVA硼酸盐缓冲液(0.2M，pH＝9.0)中，室温500rpm搅拌3.5h；待上述反应完成后，装入透析袋中，Tris-HCl缓冲液(0.1mol/L，pH＝8)中透析3d，每天换透析液2次，透析完成后冻干，-20℃保存备用。