[发明专利]一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用作人肺腺癌标志物的质膜蛋白Flotillin-1的应用方法。

背景技术

肺癌是最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率已居恶性肿瘤之首，严重威胁人类健康。作为肺癌的一类，肺腺癌在各类肺癌中约占20∽30％。近年来，人肺腺癌的发病率呈逐步上升，且病人的死亡率高，预后差。临床上，肺腺癌发病较隐匿，在早期一般没有明显的临床症状，大多数患者就诊时已发生癌细胞的侵袭或转移，且无有效判断肺腺癌癌变的标志物。因此，寻找肺腺癌的有效标志物，准确判断肺腺癌的临床分期和预后成为广大医学研究者的迫切任务。

发明内容

本发明中的Flotillin-1是脂筏的一种标记蛋白。人Flotillin-1基因(Genebank登录号ID 10211)位于染色体6p21.3区段，全长15kb，由13个外显子和12个内含子组成。flotillins蛋白被认为是属于SPFH(stomatins，prohibitins，flotillins，HflK/C)蛋白家族。人Flotillin-1蛋白由427个氨基酸组成，(蛋白质登录号O75955，www.expasy.org)它在体内广泛表达，而且高度保守，这就提示着它可能在不同的组织和细胞内发挥着不同的作用，但其在肺腺癌中确切的功能不清楚。

发明内容

本发明的目的是提供一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1的应用方法；为有效判断肺腺癌癌变进程提供科学依据。

一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1用于制备诊断、预测、检测或筛查人肺腺癌的制剂；特别是用于制备诊断、预测、检测或筛查人肺腺癌的试剂盒。

一种人肺腺癌蛋白质标志物Flotillin-1还可以用于制备诊断、预测、检测或筛查人肺腺癌癌细胞扩散、肺腺癌淋巴结转移、肺腺癌临床分期、肺腺癌患者复发的制剂；特别是用于制备诊断、预测、检测或筛查人肺腺癌癌细胞扩散、肺腺癌淋巴结转移、肺腺癌临床分期、肺腺癌患者复发的试剂盒。

本发明提供了一个用于区分人肺腺癌组织以及癌旁正常肺组织、无淋巴结转移肺腺癌组织和有淋巴结转移肺腺癌组织的质膜蛋白标志物Flotillin-1，利用该标志物制备判断人肺腺癌、肺腺癌扩散，肺腺癌淋巴结转移、临床分期、肺腺癌患者复发和预后的制剂。本发明为有效判断人肺腺癌癌变进程提供科学依据。

附图说明

图1是人肺腺癌组织质膜纯度鉴定图。其中1-A是质膜纯化后透射电镜图谱，1-B是Western blotting检测质膜纯化前后Na⁺/K⁺ATPase(质膜标志蛋白)和Prohibitin(细粒体标志蛋白)表达情况，1-C是质膜纯化前后Na⁺/K⁺ATPase和Prohibitin表达水平直方图。WTL表示总组织裂解液，PM表示纯化后的质膜。

图2是两次iTRQA试剂标记，LC-MS/MS分析鉴定Flotillin-1的肽序列和定量比例图。图2-A是114和116试剂标记癌旁正常肺组织质膜蛋白，115和117试剂标记肺腺癌组织质膜蛋白，质谱鉴定Flotillin-1的肽序列(VTGEVLDILR，m/z＝680.4019，z＝2)和比例图。图2-B是115和117试剂标记癌旁正常肺组织质膜蛋白，114和116试剂标记肺腺癌组织质膜蛋白，质谱鉴定Flotillin-1的肽序列LAEAEK00SQLIMQAEAEAASVR，m/z＝845.1227，z＝3)和定量比例图。这两个序列都Flotillin-1蛋白序列中的一段，两次质谱分析时分别检测得到的，通过质谱数据结合生物信息学鉴定均为Flotillin-1。

图3是Western blot检测Flotillin-1在人肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中表达。图3-A是Western blot检测Flotillin-1在肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中表达，(N表示人肺腺癌癌旁正常组织，T表示人肺腺癌组织；PNLT表示癌旁正常肺组织，AdC表示人肺腺癌组织；GAPDH蛋白作为组织内参；图3-B是Flotillin-1在人肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中表达水平直方图。

图4是免疫组化检测Flotillin-1在癌旁正常肺组织，无转移淋巴结肺腺癌组织和有淋巴结转移肺肺腺癌组织中表达。4-A是Flotillin-1在癌旁正常肺组织中免疫组化图，4-B是Flotillin-1在无转移淋巴结肺腺癌组织中免疫组化图，4-C是Flotillin-1在有淋巴结转移肺肺腺癌组织中免疫组化图。