[发明专利]一种筛选高效降解茶籽饼粕的微生物菌株的方法

权利要求书

1.一种筛选高效降解茶籽饼粕的微生物菌株的方法，其特征包括以下几个步骤：

⑴ 高浓度茶皂素耐受菌株的筛选：配制高浓度茶籽饼粕固体培养基, 按重量百分比取茶籽饼粕10%~15%、琼脂1.5%~2.0%，水85%~90%， pH自然，120~130℃灭菌20~30 min，利用该培养基筛选高浓度茶皂素耐受菌株，编号，供进一步获得高蛋白酶活性菌株的筛选使用；

⑵ 高蛋白酶活性菌株的筛选：配制干酪素固体培养基, 按重量百分比取干酪素1.0%~2.0%、葡萄糖2.0%~4.0%，琼脂1.5%~2.0%，水85%~90%，pH 5~7，120~130℃灭菌20~30 min，利用该培养基从高浓度茶皂素耐受菌株中进一步筛选出高蛋白酶活性菌株，编号，供进一步筛选高纤维素酶活性菌株的筛选使用；

⑶ 高纤维素酶活性菌株的筛选：配制羧甲基纤维素固体培养基, 按重量百分比取羧甲基纤维素1.0%~1.5%、蛋白胨0.3%~0.5%，琼脂1.5%~2.0%，水85%~90%，pH 5~7，120~130℃灭菌20~30 min，利用该培养基从高浓度茶皂素耐受菌株、且具有高蛋白酶活性菌株中进一步筛选出高纤维素酶活性菌株，编号，4℃冰箱保存备用。

2.根据权利要求1所述的获得茶皂素高耐受性、高蛋白酶活性以及高纤维素酶活性菌株，用于摇瓶发酵降解茶籽饼粕进一步复筛：其特征包括：复筛培养基按重量百分比取茶籽饼粕2%~5%、含水重量为93%~97%，pH自然，100 mL若干瓶，置于250 mL三角瓶，120~130℃灭菌20~30 min，分别接种步骤⑶获得菌株，200~300 r/min条件下，摇床振荡培养72~84 h，选择茶皂素含量低、游离氨基酸含量高、还原糖含量高、粗蛋白降解率高、粗纤维降解率高、蛋白酶活力高、纤维素酶活力高的菌株，编号，作为茶籽饼粕发酵的生产菌种，4℃冰箱保存，备用。

3.根据权利要求2所述的获得茶皂素高耐受性、高蛋白酶活性以及高纤维素酶活性菌，用于降解茶籽饼粕的方法，其特征在于：

① 菌种制备：按重量百分比取茶籽饼粕2%~5%、麸皮1%~2%，含水重量为93%~97%，pH自然，120~130℃灭菌20~30 min，接种步骤⑶获得菌株，200 ~300 r/min条件下，摇床振荡培养24~36 h，使该种子培养液中菌体浓度达到10⁸~10⁹cfu/mL，作为茶籽饼粕发酵的生产菌种；

② 茶籽饼粕固体发酵降解：按重量百分比取茶籽饼粕40%~50%、含水重量为50%~60%，120~130℃灭菌30~40min制成茶籽饼粕固体发酵培养基；再将步骤①获得菌株以1%~3%的接种重量接种到该茶籽饼粕固体发酵培养基中，混合均匀，堆积成高0.5~0.8m，长度不限的垄堆，上面覆盖草帘，45℃~55℃下发酵5~10天，干燥后即得脱毒且降解了的固体茶籽饼粕；

③ 茶籽饼粕液体发酵降解：按重量百分比取茶籽饼粕10%~15%、含水重量为85%~90%，于100L~1000 L发酵罐中，120~130℃灭菌30~40 min制成茶籽饼粕液体发酵培养基；再将步骤①获得菌株以1%~3%的接种重量接种到装有该茶籽饼粕液体发酵罐中，32~37℃下通风发酵4~6天，浓缩后即得脱毒且降解了的茶籽饼粕水解液。