[发明专利]一株抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有与血小板膜糖蛋白的高特异性、高亲合力结合并具有抗血栓生物活性的嵌合型单克隆抗体及其应用。

背景技术

流行病学研究显示，随着生活条件的改善及人口的老龄化，近几十年来血栓栓塞性疾病所引起或并发的病变，是当前严重危害人类健康的疾病。血小板在血栓的形成中起着关键性作用，血小板聚集是血栓形成的必要过程。正常生理情况下，血栓可以防止血细胞渗漏到血管外，然而在特定的疾病条件下，血栓可以抑制或者完全阻止血液流动从而导致细胞性坏死。

发生在动脉粥样硬化斑块处的血小板聚集以及随后的血栓形成，在心绞痛、急性心肌梗塞、溶栓以及血管成形术后的血栓再形成等疾病中起着重要的作用，对心梗患者进行经皮导管血管成形术(PTCA)及溶栓治疗是挽救患者生命的重要手段。而这些治疗方法的一个重要并发症就是血小板在血管成形术造成的血管内皮损伤部位发生粘附和聚集，再次形成血栓，从而进一步加重对心脏的损伤。我们已经知道血小板通过GPIbα受体粘附于受损血管壁，是血小板血栓形成的开始步骤，因此封闭GP Ibα受体的药物可以从初始阶段就阻止血栓形成，能减少甚至防止溶栓药物治疗后的血栓再形成，并且加快血栓溶解。这类药物同样在对其他血管阻塞以及血栓栓塞性疾病的治疗中有应用前景。

近年来，对血小板在血栓形成过程中分子机制研究促进了分子靶向药物的发展，其中以针对血小板糖蛋白(GP)IIbα/IIIa的单克隆抗体阿昔单抗(abciximab，Reopro)为代表，临床应用已取得了良好的抗血栓治疗效果。然而，由于阿昔单抗也存在引起严重出血的潜在危险，所以在一定程度上阻碍了这类药物的临床应用。

为了克服抗血栓药物的缺陷，以抗血小板粘附为代表的寻找新的抗栓治疗手段在国际上正方兴未艾，人们试图通过抑制胶原-血管性血友病因子(VWF)-血小板GPIbα轴阻断血小板与胶原的起始粘附，即在早期阶段阻止血小板的黏附和活化，以达到阻止血栓形成的目的，并能减少出血的危险性。

因此，研制和开发阻断血小板GPIbα与受损血管壁之间相互作用的单抗，不仅能从血栓形成的早期阶段阻断血栓的形成，而且希望能够利用该单抗探究血小板如何通过GPIbα与血管性血友病因子A1区结合后，发生构型改变，从而调节止血功能，从而进一步阐明动脉血栓形成和发展的机理，为预防和早期治疗血栓性疾病开辟新的领域，从而开发成新型的抗动脉血栓新药。

制备针对血小板膜糖蛋白GPIbα的特异性单克隆抗体，通过阻断血管性血友病因子A1区与血小板GPIbα之间相互作用，是一种抑制血栓形成的有效方法。由于鼠源抗体在人体内可能会诱导产生人抗鼠免疫反应，这种反应可能减弱或者破坏它的治疗效果，甚至可以在病人中引起变态反应或超敏反应，因此限制了在病人中的应用。另外，在治疗血栓栓塞性疾病时，常常需要反复给药，这样更增加了这些免疫反应的发生概率。

杨剑峰博士发表的学位论文《抗血小板膜糖蛋白Ibα单克隆抗体的人源化及基于膜糖蛋白Ibα结构的活性小分子化合物研究》公开了一种抗血小板膜糖蛋白Ibα单克隆抗体，但是该抗体只识别人血小板膜糖蛋白Ibα，与比格犬，猕猴等常用模式动物血小板无交叉反应，限制了针对该抗体的各种成药性评价研究。

此外，鼠源抗体在人体内可能会诱导产生人抗鼠免疫反应，这种反应可能减弱或者破坏它的治疗效果，甚至可以在病人中引起变态反应或超敏反应，因此限制了在病人中的应用。另外，在治疗血栓栓塞性疾病时，常常需要持续用药，这样更增加了这些免疫反应的发生概率。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型单克隆抗体及其应用。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：一种抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型单克隆抗体，包括鼠源重链可变区、鼠源轻链可变区；所述鼠源重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述鼠源轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

上述技术方案中，所述抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型单克隆抗体还包括：人源重链恒定区、人源轻链恒定区；其中，所述人源重链恒定区选自：IgG(γheavy chains)、IgM(μ)、IgA(α)、IgE(ε)、IgD(δ)五种同种型中的一种；所述人源轻链恒定区选自：kappa或lambda中的一种；

上述技术方案中，所述嵌合型单克隆抗体分子中的抗原结合区来自小鼠抗体，嵌合型单克隆抗体的恒定区部分来源于人免疫球蛋白。