[发明专利]苯环利定检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种利用胶体金免疫层析技术制作的一种苯环利定检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

苯环利定是一种对中枢神经系统有抑制、兴奋、镇痛和致幻作用的精神活性药物。常导致定向障碍、激越和谵妄构成的急性综合征。可产生相似效应的制剂有右苯恶啶和氯胺酮。非法使用PCP时一般是烟雾吸入(也可口服、静脉注射)。用药后5分钟内开始作用，约30分钟达到顶峰，感觉欣快、温暖、刺痛、漂浮感及与外界隔绝的宁静。也可出现视、听幻觉，以及体象改变、时空知觉扭曲、妄想和思维形式障碍。伴随的神经和生理症状与剂量有关，包括高血压、眼球震颤、共济失调、构音障碍、做怪相、出大汗、反射亢进、疼痛反应减退、肌肉强直、高热、听觉过敏和癫痫发作。作用一般持续4～6小时，但残余效应可能需要几天或更长的时间才能消失。在作用消退初期可有自伤或暴力行为。

有关苯环利定的检测方法有很多，例如：高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等方法，这些方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是存在需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求高，需要提纯处理等限制。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。本发明介绍了一种以胶体金免疫层析法快速检测苯环利定的检测试剂盒及其制备方法，该方法具有简单、快速，无需任何仪器设备，经济实用等特点，适用于快速定性检测样本中是否含有苯环利定。

胶体金免疫层析技术是20世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、免疫层析技术及胶体金显色技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。基于胶体金免疫层析技术可以制备胶体金试纸，胶体金试纸的原理是应用胶体金标记技术，以胶体金为示踪物，利用抗原抗体特异性结合反应，利用特定的显色反应在试纸上的显色而判定检测的结果，具有操作简单、检测快速、灵敏度高、特异性强，无须复杂的仪器等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单、快捷、灵敏度高、特异性强的苯环利定试剂盒及其制备方法，用于检测待检样本中是否含有苯环利定。

一种用于检测苯环利定的检测试剂盒，包括样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸样垫和PVC支撑板，在PVC支撑板上依次紧密粘附有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫。所述样品垫为玻璃纤维；所述胶体金垫为胶体金标记的苯环利定单克隆抗体聚酯膜；所述硝酸纤维素膜上依次包被有检测线(T线)和质控线(C线)，其中检测线(T线)上包被了苯环利定-BSA偶联抗原，质控线(C线)上包被了羊抗鼠IgG多克隆抗体；所述吸样垫为吸水纸。

本发明采用纳米胶体金技术及抗原抗体特异性反应，应用免疫竞争抑制反应的原理制备而成，通过待检样本中含有的苯环利定与硝酸纤维素膜上检测线(T线)包被的苯环利定-BSA偶联抗原竞争结合胶体金标记的苯环利定单克隆抗体，通过T线的显色来判定待检样本中是否含有苯环利定。

本发明提供了一种苯环利定检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备苯环利定偶联抗原

将苯环利定与BSA偶联，合成苯环利定-BSA偶联抗原，作为苯环利定偶联抗原。

(2)制备苯环利定单克隆抗体

采用苯环利定-BSA偶联抗原为免疫原免疫BALB/C小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗苯环利定单克隆抗体的杂交瘤细胞株；以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得苯环利定单克隆抗体。

(3)制备胶体金

取90ml纯化水于洁净的圆底烧瓶中，于电磁加热套中搅拌并加热，等待沸腾后，加入4ml 1％的氯化金溶液，继续搅拌1min，迅速加入6ml 1％的柠檬酸三钠，溶液颜色由浅黄变成黑色最后变成酒红色，继续加热5min，取出冷却到室温，常温避光保存。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)制备胶体金垫