[发明专利]一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法。 

背景技术

石蒜科（Amarylllidaceae）石蒜属为我国和东亚一些国家的特有属，其特征相对稳定，为多年生草本植物。石蒜科植物以其含有多种有生物活性和药理活性的生物碱成分引起世界各国药物研究人员的关注。石蒜属植物很早被用作药用，据《本草纲目》记载，石蒜属植物具有解毒、怯痰、利尿、催吐功能。石蒜属植物的化学成分主要包括生物碱和黄酮化合物方面。生物碱主要有石蒜碱、伪石蒜碱、高石蒜碱、石蒜伦碱、多花石蒜碱、加兰他敏、力克拉敏、石蒜西定、小星蒜碱等。 

我国天然药物研究人员从20世纪50年代开始石蒜生物碱的研究和药物开发，氢溴酸加兰他敏和二氢加兰他敏（力克拉敏）已经用于临床；1983年抗肿瘤新药氧化石蒜碱通过临床鉴定。进入21世纪，通过新的药理筛选生物活性，发现了石蒜生物碱更多的药理活性。 

伪石蒜碱最初是从石蒜科植物水仙及石蒜中提取的生物碱，其游离碱及盐酸盐在动物耐受量下，对大鼠W-256的生长有明显的抑制作用。美国夏威夷大学的Furusawa等人于1971-1974年的药理研究，证明了伪石蒜碱能延长患白血病脾肿大的大白鼠的寿命，抑制逆转录酶活性。 

伪石蒜碱（Pseudolycorine）又称假石蒜碱，白色针状晶体，熔点247～248℃，其盐酸盐为白色片状晶体，熔点288℃，具有抗肿瘤和病毒作用，文献资料记载伪石蒜碱提取分离资料较少，1978年第五期《中草药通讯》（现名《中草药》）有所报道，本发明是本公司科研人员经较长时间的研究的成果，与现有技术工艺和工艺条件完全不同。 

发明内容

本发明的目的，在于提供一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法，达到工艺路线合理，有机溶剂用量最省，得到产品纯度高，产品质量稳定的要求。 

本发明一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是以石蒜属植物鳞茎为原料，依次按以下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱： 

（1）石蒜鳞茎干粉制作：将新鲜干净石蒜鳞茎切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉；

（2）稀碱水拌湿：按50㎏石蒜鳞茎干粉加10㎏ 1∶1（V/V）氨水混合拌匀，得弱碱性石蒜鳞茎粉；

（3）乙酸乙酯浸取：乙酸乙酯总用量为石蒜鳞茎干粉重量10倍，分三次回流提取，每次1.5h，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；

（4）蒸馏回收乙酸乙酯：蒸馏回收乙酸乙酯得乙酸乙酯浸膏；

（5）酸溶：每1㎏乙酸乙酯浸膏加5㎏稀硫酸溶解，稀硫酸浓度0.5％ V/V，过滤除杂后得酸性水溶液；

（6）氯仿萃取除杂：按上述酸性水溶液体积∶氯仿体积＝1∶1的比例用氯仿逆流萃取除杂，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；

（7）调pH：用40-50%W/W浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10，得氯仿除杂后的碱性水溶液；

（8）盐析除杂：在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液饱和，搅拌均匀，离心过滤除去杂质，得盐析液；

（9）乙酸乙酯萃取：按盐析液体积∶乙酸乙酯体积＝1∶1.5-2的比例，用乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；

（10）蒸馏回收乙酸乙酯：蒸馏乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏；

（11）加水溶解：用蒸馏水溶解乙酸乙酯萃取膏，每1㎏乙酸乙酯萃取膏加蒸馏水5㎏，充分溶解，离心过滤，保留清液；

（12）柱层析：清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用4倍柱体积的30％（V/V）甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；

（13）重结晶：将伪石蒜碱粗品用50％（V/V）乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；

（14）真空干燥：重结晶所得伪石蒜碱纯品于65℃真空干燥10小时，粉碎得纯度为98.4％的伪石蒜碱。

其中步骤（2）稀碱水拌湿所用的稀碱液还包括用碳酸氢钠或碳酸钠的水溶液代替稀氨水溶液。

其中步骤（5）溶液所用的酸除硫酸外，还能用稀盐酸。 

其中步骤（12）柱层析洗脱液可用乙醇水溶液代替甲醇水溶液。 

步骤（11）加水溶解后留下的不溶物残渣可用于生产加兰他敏和石蒜碱。 

本发明的创新点在于：（1）提供了一种综合利用石蒜资源的方法；（2）提供了一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法；（3）本发明结合逆流萃取、盐析和大孔树脂层析，工艺路径合理，得到产品纯度高，质量稳定。