[发明专利]卵巢癌易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种卵巢癌易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估卵巢癌发病的风险级别，并作为预防和治疗卵巢癌的方向指导。

背景技术

卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，却占各类妇科肿瘤的首位，对妇女生命造成严重威胁。卵巢癌之所以是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，是因为其发病隐匿、进展迅速，70％-80％的卵巢癌患者发现时已为晚期，5年生存率仅为20％-30％，而早期卵巢癌患者的生存率可达90％。因此提高卵巢癌的早期诊断水平、争取有利的治疗时机，对改善预后有重要意义。

目前，卵巢癌易感基因检测主要依据卵巢癌家族史和基因多态性诊断试验。基因多态性诊断实验主要围绕MTHFR、GSTT1、CYP1B1基因进行。

MTHFR是叶酸代谢关键酶，催化5，10-亚甲基四氢叶酸不可逆的转变成5-甲基四氢叶酸，后者作为叶酸在血浆和组织中存在的主要形式参与同型半胱氨酸转化为S-腺苷甲硫氨酸的过程，而S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，在机体代谢、DNA甲基化和核酸合成过程中起重要作用。研究发现MTHFR基因上C677T多态性位点突变可以导致酶的热稳定性和酶活性的下降，从而引起DNA甲基化出现异常，这种甲基化异常可能导致癌基因和抑癌基因表达异常，影响对细胞生长和功能的调控，促进癌症的发生。研究表明，MTHFR基因C677T多态性与卵巢癌的发生密切相关。

谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)属于II相代谢酶，能促进各种亲电子的化合物(包括环境致癌物及其中间代谢产物)与谷胱甘肽结合，形成易溶于水的化合物排除体外，是与毒物或致癌物的解毒代谢有关的酶类，已知人类GSTs家族中GSTM1和GSTT1与肿瘤发生的关系比较密切。GSTT1具有present和null两个等位基因，其中present具有正常的酶活性，而null基因是指结构基因缺失的纯合子，又称为空白基因型，缺乏GSTT1酶活性。正常的GSTT1酶活性可能通过促进致癌剂的亲电作用及从体内的排除而保护易感组织，防止体细胞的DNA突变，而GSTT1基因的纯和缺失可能会降低或丧失机体代谢及排出致癌物的功能，从而具有较大的肿瘤危险性。因此可以将GSTT1基因的缺失基因型作为卵巢癌发生的危险因素之一。

综上所述，鉴于MTHFR、GSTT1、CYP1B1在卵巢癌变过程中有着不可忽视的作用，可以将上述基因作为遗传易感因素来检测出女性在卵巢癌发生相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患卵巢癌的女性高危人群，从而有针对性的预防和治疗卵巢癌，这对于降低女性卵巢癌的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于MTHFR基因上C677T，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)，CYP1B1基因上Leu432Val的3个单核苷酸多态性位点基因型可作为评估卵巢癌发病的危险因子的基础上，本发明提供一种卵巢癌易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测MTHFR基因上C677T，GSTT1基因是否缺失(Null/Present)，CYP1B1基因上Leu432Val的3个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

PCR反应体系：10×PCR反应缓冲液2.5ul；25mM dNTP混合液0.2ul；5U/ul Taq DNA聚合酶0.125ul；20uM特异性引物对(每条引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR产物纯化体系：1U/ul SAP酶0.75ul；10U/ul ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。

测序反应体系：25％BigDye mix 1ul；3.2uM DNA测序引物1ul；125mMEDTA溶液1ul；100％乙醇溶液15ul；70％乙醇溶液30ul；HIDI溶液8ul；ddH2O2ul。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式