[发明专利]从红果小檗粗提物中筛选出的1型艾滋病病毒蛋白酶抑制剂及其应用

权利要求书

1.一种抗艾滋病病毒物质的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1).制备艾滋病病毒蛋白酶，并结晶得到艾滋病病毒蛋白酶的晶体；

(2).制备天然产物提取物，所述提取物包括通过提取、溶剂萃取或大孔树脂、硅胶等柱层析分离纯化得到的各个部位；

(3).将步骤(2)得到的天然产物提取物溶于有机溶剂；使用缓冲溶液对步骤(1)中的艾滋病病毒蛋白酶溶解、稀释，然后将两种溶液混合得到混合溶液，配制荧光底物溶液，再将荧光底物溶液加入上述混合溶液中；

(4).检测样品的荧光强度变化，并与不加入天然产物提取物的阴性对照品比较，得到具有抑制艾滋病病毒蛋白酶的活性天然产物提取物；

其中，所述艾滋病病毒蛋白酶为1型人类免疫缺陷病毒蛋白酶，制备所用HIV-1protease质粒的氨基酸序列为PQITLWQRPLVTIKIGGQLKEALLDTGADDTVLEEMNLPGRWKPKMIGGIGGFIKVRQYDQILIEICGHKAIGTVLVGPTPVNIIGRNLLTQIGCTLNF；

采用活性追踪的方法，对确定的具有活性的天然产物提取物进一步分离纯化，对分离纯化的组分重复步骤(3)和(4)，如此多级分离、纯化和步骤(3)-(4)的活性测定，最终得到具有活性的单体化合物，所述单体化合物为小檗碱或其药学上可接受盐；

步骤(2)所述的天然产物提取物为红果小檗经过乙醇提取、乙酸乙酯萃取然后用HP-20型大孔树脂柱层析分离，得到30％-80％的乙醇洗脱部位。

2.根据权利要求1的筛选方法，其特征在于：步骤(3)所述的有机溶剂选自：戊烷、己烷、辛烷、环己烷、环己酮、甲苯环己酮、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇、乙醚、醋酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、丙酮、甲基丁酮、甲基异丁酮、乙二醇单甲醚、乙二醇单乙醚、乙二醇单丁醚、乙腈、吡啶、二甲基亚砜、二氯甲酰胺。

3.根据权利要求1的筛选方法，其特征在于：步骤(3)所述的荧光底物为MCA-γ-Abu-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-Gln-Lys(Dnp)-Lys-NH2。

4.根据权利要求1的筛选方法，其特征在于：步骤(4)所述的阴性 对照品为不加入天然产物提取物，用1μL100％DMSO代替，其余制备条件与天然产物提取物相同。