[发明专利]一种从羊踯躅提取物中制备闹羊花素III的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种闹羊花素III的制备方法，特别是涉及一种从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素III的方法。

背景技术

羊踯躅Rhododendron molle G.. Don为杜鹃花科植物，分布于我国长江流域至南部各地，生长于山坡、灌丛或草丛中，具有祛风、止咳、散瘀和止痛等功效，用于风寒湿痹，跌打损伤，痔漏，癣疮。

闹羊花素III是存在于羊踯躅中的一类化合物，被证明具有较好的降压和减慢心率等作用，是羊踯躅的主要活性成分，曾在临床上用作降血压药（天然产物研究与开发，1999, 11(5):109-113）。目前，未见到闹羊花素III的制备工艺的相关报道，因此，闹羊花素III分离手段的不足是限制其医药用途的一个主要原因。闹羊花素III结构式如下。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素III的方法，以解决现有技术中制备手段繁琐，产率极低的技术问题。 

为解决上述技术问题，本发明从羊踯躅提取物中分离制备闹羊花素III的方法，包括步骤：

（1）大孔树脂纯化步骤

将羊踯躅提取物通过大孔树脂分离，分别以纯水、体积比为30%乙醇-水、60%乙醇-水、95%乙醇-水洗脱，每个部分洗脱6-10 BV，洗脱液作TLC检识，闹羊花素III在30 %乙醇-水部位，减压回收30%乙醇-水部位，得纯化的浸膏B；

（2）反相C₁₈色谱纯化步骤

将步骤（1）所得的浸膏B用反相硅胶柱色谱分离，分别以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱6-10 BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素III的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素III。

其中，所述步骤（1）中的羊踯躅是分别以6-10倍体积，浓度比为0%-95%的乙醇-水提取回流2-3次，每次1-2小时。

采用本发明的方法依次经（1）大孔吸附树脂纯化（2）反相色谱纯化，能极大地提高得率，因此，该方法是一种制备闹羊花素III的简化工艺，可用于闹羊花素III的工业制备。

附图说明

图1是闹羊花素III的¹H-NMR图。    

图2是闹羊花素III的¹³C-NMR图。

图3是闹羊花素III的DEPT图。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。

实施例1 闹羊花素III的制备

羊踯躅药材1 kg，去除杂质后粉碎成粗粉，以10、10、10倍的纯水提取回流三次，每次1小时，合并提取液，减压回收得浸膏A为45 g。

将浸膏A用大孔吸附树脂柱色谱分离（浸膏样品与大孔吸附树脂重量比为1:30，大孔吸附树脂柱规格Φ 100*1000 mm），并以纯水、体积比为30%乙醇-水、60%乙醇-水、95%乙醇-水洗脱，每个部分洗脱8BV，将洗脱液薄层硅胶板（GF₂₅₄）点样，以体积比为7:3:0.5的氯仿-甲醇-水溶液展开后用体积比为10%的硫酸-乙醇溶液显色，减压回收含有闹羊花素III的部分，得浸膏B约5 g。将浸膏B用反相C₁₈硅胶柱色谱分离（浸膏样品与C₁₈硅胶重量比为1:50，硅胶柱规格Φ 60*600 mm），以体积比为20%、30%、40%的甲醇-水溶液洗脱，每个部分洗脱10 BV，洗脱液作TLC检识，合并含有闹羊花素III的流份，减压回收溶剂，即得纯化的闹羊花素III 0.32g。

最终所得闹羊花素III经常规公知的NMR方法鉴定【Phytochemistry, 1991, 30(6):1797-1800】，并经ELSD检测【Kromasil-C₁₈ 柱(4.6 mm*250 mm)，雾化温度为40℃，蒸发温度为60℃，流动相为体积比30:70的水-甲醇溶液，流速1.5 mL·min^-1，进样量10 μl，柱温 25℃】含量在98%以上，其得率为0.032%。

实施例2 闹羊花素III的制备

羊踯躅药材1 kg，去除杂质后粉碎成粗粉，以8、6、6倍的浓度比为70 %提取回流三次，每次1.5小时，合并提取液，减压回收得浸膏A为55 g。