[发明专利]二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于抗体领域，涉及一种双链抗体，特别涉及一种二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体及其制备方法与应用。

背景技术

bFGF称为碱性成纤维细胞生长因子，是一种广泛的有丝分裂原，可通过自分泌或旁分泌的方式促进多种细胞，包括肿瘤细胞及血管内皮细胞的增殖、分化以及抗凋亡作用。bFGF具有多种生物学作用，包括促生长、分裂、分化功能；对成纤维细胞具有强烈的促增殖作用。近年来越来越多的研究表明，bFGF在多种肿瘤组织中高表达并与肿瘤发生发展具有密不可分的关系。因此，bFGF可以作为一些肿瘤治疗的良好靶点。用抗体中和bFGF，阻断其与受体的结合也被认为是用于肿瘤治疗的一种有效方法。

治疗性单克隆抗体在临床上已研究了三十多年，有超过400种治疗性单克隆抗体进入商业支持的临床阶段，现在单克隆抗体已经被建立成为针对多种疾病的关键治疗方式。1995年，第一个鼠源性单抗edrecolomab在德国被批准，这次批准是开创性的，但是由于鼠源性抗体作为异种蛋白应用于人体可引起针对异种蛋白的免疫反应，产生抗小鼠抗体(HAMA)，批准后的研究中证明这种治疗方法不及标准的治疗方法，edrecolomab最终退出了市场。随着分子生物学技术的进展和抗体结构的阐明，DNA重组技术开始应用于抗体的改造，出现了各种各样的基因工程抗体。最初出现的基因工程抗体是为了降低鼠单抗的异源性而进行的人源化改造，包括人鼠嵌合抗体和改型抗体。前者操作简便，但人源化程度稍低；后者技术难度较大，但人源化程度较高。抗体库技术的出现为人源化提供了新的手段，但技术路线尚需进一步成熟。接着为了改进抗体的性能陆续出现了各种小分子抗体和抗体融合蛋白等。其中小分子抗体作为具有抗原结合功能的抗体分子片段，具有分子量小、穿透力强、易于构建及表达等优点。

双链抗体(Diabody)是在单链抗体的基础上构建的一种小分子抗体，具有分子量适中，双价等特点，是最好的肿瘤靶向抗体分子之一。且其亦具有瘤组织穿透力强和血液清除率适中等特点。二硫键稳定的双链抗体(ds-Diabody)是在Diabody的基础上通过引物二硫键而成为稳定的Diabody，具有提高稳定性的作用。因此具有广阔的应用前景。到目前为止尚未见到任何关于抗bFGF人源Diabody的文献和专利报道。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体。该二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体含有两个抗原结合位点，属于二价抗体，具有较好的亲和力；它是在单链抗体的基础上，通过定点突变引入2个半胱氨酸从而引入二硫键，构建成ds-Diabody，使两条肽链以共价键结合，大大提高了稳定性。

本发明的另一发明目的在于提供所述二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种二硫键稳定的抗bFGF人源双链抗体，其氨基酸序列如下所示：QSVLTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTVVFGCGTKLTVLGGGGSQVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYEMNWVRQAPGKCLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELTGDWGAFD IWGQGTMVTVSS；