[发明专利]一种检测抗核抗体的试剂装置及其方法

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种抗核抗体的试剂装置及其方法，属于临床免疫学检测技术领域。

背景技术

自身免疫性疾病是免疫系统对自身抗体的成分发生免疫反应，造成损害而引发疾病，可累计多器官、多系统，对患者造成的危害极大。近年来，自身免性疾病的发病率明显上升，约占世界总人口的3％～5％，常见的自身免疫疾病有：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、类风湿性关节炎、硬皮病、甲状腺机能亢进、青少年糖尿病、原发性血小板紫癜、自身免疫性溶血性贫血、溃疡性结肠炎以及许多种皮肤病、慢性肝病等。

虽然不同的自身免疫疾病各有其特殊的临床表现和诊断标准，但其常具有一个共同特征就是患者的血清中常可以检测出高滴度的自身抗体或能与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞，其中常通过检测血清中抗核抗体(ANA)来诊断自身免疫疾病。ANA是以真核细胞的核成份为靶抗原的自身抗体的总称。ANA靶抗原分布于整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。

临床检测抗核抗体的常见方法包括免疫印迹法、免疫双扩散法、间接免疫荧光法、斑点免疫结合法、免疫沉淀法、免疫诊断蛋白芯片、酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着一些不足之处。

一、免疫印迹法

免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其不足之处在于：

(1)只能进行定性和半定量分析，无法得出被检物质具体的量。

(2)操作步骤繁琐，试验用时较长。

(3)检测的灵敏度还有待提高。

二、免疫双扩散法

免疫双扩散法是抗原与抗体分子在凝胶空间网络内自由扩散，当其相遇时，在比例合适处会形成免疫复合物沉淀线。该方法不用很多的特殊仪器，价格低廉，特异性高。但其操作费时费力，需要用肉眼来观察沉淀环，结果灵敏度低，判断不客观，对实验室技术人员的技术水平和经验要求较高，不同操作人员甚至是同一操作人员不同次操作结果的一致性较差。

三、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量测定。

四、斑点免疫结合法

斑点免疫结合法是将抗原或抗体包被在硝酸纤维膜上，通过渗滤，如斑点免疫渗滤法、毛细管作用如斑点免疫层析法使抗原抗体快速反应，最后通过目测进行观察判断的一种固相免疫检测技术。此方法的特点是快速、操作简单，但其灵敏度偏低，特异性及重复性较差，同时检查多个项目时存在干扰，且价格较高。

五、免疫沉淀法

主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。本法只是单一的定性试验，不能定量分析；且本底不易清除，对结果有很大影响。

六、免疫诊断蛋白芯片

蛋白芯片的技术原理是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面形成微阵列，根据蛋白质分子间特异性结合的原理，构建微流体生物化学分析系统，以实现对生物分子准确、快速、同时进行多项指标的检测。但由于该方法是把抗原包被在用于制备蛋白质芯片的基底-玻片或者膜上，并且玻片在点样前要经过醛基化或多聚赖氨酸等预处理，导致生产成本增加，以及后续实验的操作繁琐，重复性差，市场推广性不强。

七、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用于检测抗抗核抗体，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；