[发明专利]一种检测抗肾小球基底膜抗体的试剂装置及其方法

说明书

技术领域

本发明申请涉及一种检测抗肾小球基底膜抗体的试剂装置及其方法，属于临床免疫学检测技术领域。

背景技术

古德帕斯丘综合征是一种以肾脏损害为主的自身免疫性疾病，是一种增生性肾小球肾炎伴致命的肺出血疾病。主要表现为肾小球肾炎、肺出血、形成抗肾小球基底膜抗体三联症。组织学特征为免疫球蛋白沿肾小球基底膜不断沉积。其病发率为每年每100万居民中发生0.5至1例，是一种急发病，如果不经治疗，会出现肾衰和呼吸衰竭，病死率高达75％～90％。

肾小球基底膜(GBM)在解剖学构造上是上皮细胞和结缔组织之间的屏障，VI胶原蛋白是GBM特有的胶原蛋白，它和其他分子(如层连蛋白、副层连蛋白)一起构成基质。六条α-链(多肽，含超过1650个氨基酸)中，每3条形成一个螺旋体，构成了VI胶原蛋白结构的亚单位。古德帕斯丘综合征特异性抗肾小球基底膜抗体作用于肾小球基底膜VI型胶原蛋白的29kDa NC1端。目前，通过证实肾小球肾炎、肺出血和抗肾小球基底膜VI胶原蛋白α-3链抗体三联症的存在可以诊断古德帕斯丘综合征。

临床检测抗肾小球基底膜抗体的常见方法包括放射免疫分析法、间接免疫荧光法、ELISA法。但这些方法都存在着不足之处。

一、放射免疫分析法

放射免疫分析法是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法。

该法极其敏感而又极其特异，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本也不低。同时，还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已经被ELISA所取代。

二、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量测定。

三、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛用于检测抗肾小球基底膜抗体，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1)使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

(2)定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；

(3)缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

(4)检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；

(5)检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差；

(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数×48/96人份，如果需要检测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10×48/96人份，如果只有一份样本需要检测10个不同的项目，也需要配置10×48/96人份的试剂，存在着不够经济合理的缺点。

发明内容

本发明专利申请即是针对目前对于抗肾小球基底膜抗体的检测中存在的上述不足之处，提供一种能够进行独立单人份检测的试剂装置及其检测方法。