[发明专利]一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin 的方法及其专用菌株

权利要求书

1.矛束霉(Doratomyces sp.)XZ059，其保藏编号为CGMCC No.5526。

2.一种制备抗肿瘤化合物Rasfonin的方法，包括如下步骤：

a)将Doratomyces sp.进行固体(稻米)发酵，得到发酵培养物；

b)向所述发酵培养产物中加入乙酸乙酯进行提取，得到提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物；

c)将所述粗提物进行减压硅胶柱层析分离而得到活性组分溶液，将所述活性组分溶液用高效液相色谱分离得到化合物Rasfonin。

所述Rasfonin的化学式如式I所示：

(式I)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵中使用的培养基是稻米；

所述发酵的条件为：温度为25℃，静置培养，时间为40d。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述发酵后，包括如下提取步骤：用不溶于水的且在25℃是液态的有机溶剂对所述含有Rasfonin的发酵培养产物进行浸泡提取三次，得到提取液，将所述提取液减压蒸馏，得到粗提物8.0g；

所述不溶于水的且在25℃是液态的有机溶剂为乙酸乙酯。

5.根据权利要求2、3或4所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述得到粗提物后，将粗提物用正己烷-二氯甲烷-甲醇体系进行减压硅胶柱层析，所用流动相为：正己烷∶二氯甲烷(v/v)＝100∶0，99∶1，97∶3，95∶5，92∶8，90∶10，85∶15，80∶20，75∶25，70∶30，60∶40，50∶50，40∶60，30∶70，20∶80，10∶90，0∶100；二氯甲烷∶甲醇(v/v)＝200∶1，100∶1，100∶1.5，100∶2，100∶2.5，100∶3，100∶4，100∶5，0∶100；共计26个梯度，每个梯度的洗脱体积均为400mL，将每个梯度的洗脱液减压蒸馏，按照极性由小到大的顺序将粗提物分成26个组分，在活性跟踪[测试26个组分对乳腺癌细胞(MCF-7)和肺癌细胞(A549)的抑制活性]指导下，发现在二氯甲烷∶甲醇＝100∶2.5(v/v)作为流动相洗脱得到的组分有抑制活性，收集活性组分(400mg)；

所述用减压硅胶柱分离纯化中，所用的填料为薄层层析硅胶H；

所述减压硅胶柱的大小为高40cm和直径6cm；

所述减压硅胶柱中装125g硅胶。

6.根据权利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中，在所述用减压硅胶柱分离纯化后，包括高效液相色谱分离的步骤；所述高效液相色谱分离条件是：采用Agilent 1260型半制备高压液相色谱仪，Agilent C₁₈反相半制备色谱柱(5μm、9.4x 250mm)，流速2.0mL/min，用甲醇和水作为流动相，以甲醇与水的体积比为75∶25的混合溶液进行等度洗脱，洗脱时间为25min，收集保留时间为17.45min的洗脱峰，得到抗肿瘤化合物Rasfonin共200mg。

7.根据权利要求2-6中任一所述的方法，其特征在于：所述用减压硅胶柱分离纯化中，是将所述含有Rasfonin的发酵培养产物的乙酸乙酯粗提物进行分离纯化；

所述高效液相色谱分离中，是将所述用二氯甲烷和甲醇的体积比为100∶2.5的混合溶液洗脱下来的溶液浓缩组分进行分离。