[发明专利]一种可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌及其构建

权利要求书

1.一种可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于是由以下步骤构建得到：

(1)合成卡那抗性基因，并将其插入到大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中；

(2)PCR扩增乙酸激酶编码基因的某一段序列，为pta-up序列；再将pta-up序列插入到步骤(1)的已插入卡那抗性基因的大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体中，构建得到自杀载体1；

(3)PCR扩增磷酸转乙酰酶编码基因的某一段序列，为ack-down序列；再将ack-down序列插入到自杀载体1中，获得自杀载体pPuKAd；

(4)将自杀载体pPuKAd转化入嗜热厌氧杆菌，并经抗性筛选后得到可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌。

2.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(2)所述的某一段序列为乙酸激酶编码基因的N端部分序列。

3.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(3)所述的某一段序列为磷酸转乙酰酶编码基因的C端部分序列。

4.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(1)所述的大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体为pUC18、pUC19、pBluescript II SK(+)、pSGD8或pSGD9。

5.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(1)所述的大肠杆菌和嗜热厌氧杆菌穿梭载体为pBluescript IISK(+)。

6.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(4)所述转化的方法为热激法、电转化法、结合转化或双亲本杂交。

7.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(4)所述的嗜热厌氧杆菌为嗜热厌氧杆菌属Thermoanaerobacterium sp.或梭菌属Clostridium sp.。

8.根据权利要求1所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌，其特征在于：步骤(4)所述的嗜热厌氧杆菌为嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium aotearoence SCUT27)。

9.权利要求1-8任一项所述的可利用木糖发酵生产光学纯L-乳酸的工程菌在发酵生产光学纯L-乳酸中的应用。