[发明专利]一种定量检测人心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫层析方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种定量检测人心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫层析方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)用化学交联或生物分子间特异性作用将人心型脂肪酸结合蛋白的特异性抗体连接到量子点表面，得到抗体修饰的量子点，所述抗体修饰的量子点的发射波长范围为550～1300nm；

步骤2)将步骤1)得到的抗体修饰的量子点固定在标记垫上，且标记垫上同时固定有质控分子修饰的量子点，所述质控分子修饰的量子点的发射波长与步骤1)得到的抗体修饰的量子点的发射波长不同，且波长范围为550～1300nm，在层析膜上分别设有定量带和质控带，其中质控带固定有能与所述质控分子特异性结合的生物分子，定量带固定有对应心型脂肪酸结合蛋白的与步骤1)所述特异性抗体不同抗原决定簇的特异性抗体；

步骤3)以样品垫、标记垫、层析膜、吸水垫和底板构建成荧光免疫层析试纸条，其中所述层析膜为弱荧光层析膜，底板具低荧光特性；

步骤4)试纸条免疫层析后，检测定量带和质控带的荧光信号强度，并以质控带荧光信号强度校正定量带的荧光信号强度，进而实现人心型脂肪酸结合蛋白的定量检测。

1.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤1)所述抗体修饰的量子点的发射波长为900nm，步骤2)所述质控分子修饰的量子点的发射波长为600nm。

2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤1)所述抗体修饰的量子点的发射波长为650nm，步骤2)所述质控分子修饰的量子点的发射波长为570nm。

3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤1)所述量子点为单一化合物形成的量子点或几种化合物组成的复合量子点。

4.根据权利要求4所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，所述化合物为选自ZnS、CdS、HgS、MgS、CdSe、MgSe、ZnSe、PbSe、PbSe、CdTe、MgTe、ZnTe、HgTe、InAs、InP中的任意一种或几种，且可掺杂Cu、Mn和Hg。

5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤3)所述层析膜在大于550nm时荧光很弱或不含荧光剂。

6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤3)所述底板为黑色，表面附有不干胶，且两者均不含荧光剂。

7.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤3)所述荧光免疫层析试纸条还包括能使样品中液体与细胞分离的过滤膜。

8.根据权利要求1所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，步骤4)所述免疫层析为预润免疫层析，其中预润免疫层析为先以缓冲液预润层析膜，再于样品垫中加入样品，当样品流经定量带和质控带后，进行荧光定量检测。

9.根据权利要求9所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，所述预润层析膜是指将缓冲液直接滴加于层析膜。

10.根据权利要求9所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，当所述预润层析膜为将缓冲液间接滴加于层析膜时，步骤3)所述的荧光免疫层析试纸条还包括润湿垫和连接垫，其中润湿垫分别与层析膜和连接垫以毛细作用接触，连接垫分别与润湿垫和吸水垫以毛细作用接触。

11.根据权利要求9所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，所述碱性缓冲液为pH 7.2～11的碱性缓冲液。

12.根据权利要求12所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，所述碱性缓冲液为包含牛血清白蛋白、酪蛋白和表面活性剂的碱性缓冲液。

13.根据权利要求12所述的荧光免疫层析方法，其特征在于，所述碱性缓冲液为包含牛血清白蛋白和吐温20的pH 9.0的磷酸缓冲液。