[发明专利]检测肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒

权利要求书

1.一种检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2和肌红蛋白标准品，其中试剂R1为反应缓冲液，试剂R2为苯乙烯胶乳颗粒、肌红蛋白抗体和反应缓冲液形成的白色胶乳悬浊液，肌红蛋白标准品为含有不同浓度肌红蛋白的反应缓冲液，其特征在于所述的肌红蛋白抗体先利用高碘酸盐氧化然后利用碳化二亚胺和双官能团交联剂定向固定在苯乙烯胶乳颗粒上。

2.根据权利要求1所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述的反应缓冲液为PBS缓冲液、Hepes缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或氯化铵缓冲液中的一种或几种，缓冲液浓度在20-500mM之间。

3.根据权利要求1或2所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述的苯乙烯胶乳颗粒粒径范围为0.05-0.5μm，羧基含量为100-300μmol/g。

4.根据权利要求1至3任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述的肌红蛋白抗体为非亲和的IgG抗体、亲和的IgG抗体或IgY抗体中的一种或两种，抗体来源为兔抗人、山羊抗人、绵羊抗人、鼠抗人、鸡抗人、鸭抗人抗体中的一种或两种，抗体种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。

5.根据权利要求1至4任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述的肌红蛋白抗体利用碳化二亚胺和双官能团交联剂定向固定在苯乙烯胶乳颗粒的途径为：称取2-20mg碳化二亚胺加入20-200ml适当缓冲液中溶解均匀，加入1-10ml苯乙烯胶乳颗粒，混匀，37℃摇床反应0.5-3h，然后加入15-150mg双官能团交联剂，37℃摇床反应0.5-6h，形成活化的苯乙烯胶乳颗粒；量取0.35-35ml肌红蛋白抗体与300-3000ml适当缓冲液混匀，放入三角瓶中，加入0.002-0.05mmol/l的高碘酸钠0.4-4ml混匀10-60min，加入已活化的苯乙烯胶乳颗粒50ml，颠倒混匀，37℃摇床反应2-8h后离心，去上清液，超声分散后置于缓冲液中形成试剂R2。

6.根据权利要求1至5任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于双官能团交联剂选自乙二胺、丁二胺、乙二胺二酰肼的一种或几种。

7.根据权利要求1至6任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于试剂R2中结合有人肌红蛋白抗体的苯乙烯胶乳含量为0.5-3mg/ml。

8.根据权利要求1至7任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于所述的肌红蛋白标准品为含有稳定剂的不同浓度的肌红蛋白的反应缓冲液，其中肌红蛋白含量分别为100、200、400、800ng/ml或类似比例的浓度。

9.根据权利要求8所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于所述肌红蛋白标准品中含有的稳定剂选自牛血清白蛋白、鸡蛋清蛋白、多聚赖氨酸、脱脂奶粉、抗生素、叠氮钠或硫柳汞中的一种或几种，浓度在0.05-5g/L。

10.根据权利要求1至9任一项所述的检测人血清或尿液中肌红蛋白含量的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于其选自具有如下组成的试剂盒：

试剂盒1：

试剂R1：0.5％NaCl、0.5％BSA、0.05％NaN₃、20mM甘氨酸缓冲液pH8，

试剂R2：0.5％BSA、0.05％NaN₃、20mM甘氨酸缓冲液pH8.5、40mg抗人肌红蛋白抗体，0.05μm胶乳颗粒；

肌红蛋白标准品：人肌红蛋白、0.5％BSA、0.05％NaN₃、20mMHepes缓冲液；

试剂盒2：

试剂R1：8％NaCl、5％BSA、0.5％NaN₃、500mM甘氨酸缓冲液pH8，

试剂R2：5％BSA、0.5％NaN₃、500mM甘氨酸缓冲液pH8.5、150mg抗人肌红蛋白抗体、0.5μm胶乳颗粒，

肌红蛋白标准品：人肌红蛋白、5％BSA、0.5％NaN₃、500mM Hepes缓冲液。