[发明专利]双抗体胶乳增强视黄醇结合蛋白检测试剂盒

权利要求书

1.一种检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其包括试剂1和试剂2以及校准品，其中试剂1是含有具有促进凝聚作用的多聚物的缓冲液，试剂2是含有胶乳-抗体交联物的缓冲液，校准品是血清基质或者尿液基质的至少5个不同浓度的校准液，其特征在于所述试剂2中的抗体是配对的单克隆抗体A和B，单克隆抗体A起到捕获作用，单克隆抗体B起到检测功能，优选地，单克隆抗体A、B选自鼠抗人、鸡抗人、山羊抗人抗体，优选地，选自鼠抗人抗体。

2.根据权利要求1所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：试剂1中的多聚物选自PEG6000、PEG8000、PEG20000、TWEEN20和TWEEN80，浓度范围为0.5-10％。

3.根据权利要求1或2所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：试剂1、试剂2中的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、Tris、MOPS，试剂1的pH范围是6.0-9.0；试剂2的pH范围是5.5-8.5。

4.根据权利要求1至3任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：试剂2中单克隆抗体A用量为0.1-0.5mg/ml，单克隆抗体B用量为0.1-0.5mg/ml，优选地，两个单克隆抗体A和B分别与胶乳颗粒进行包被，然后混合均匀，单克隆抗体A和B是兔抗人单克隆抗体或羊抗人单克隆抗体，优选地，单克隆抗体A和B是鼠抗人单克隆抗体。

5.根据权利要求1至4任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：制备试剂2的交联方法是化学交联或物理吸附，优选地，化学交联中胶乳是羧基修饰的聚苯乙烯颗粒；物理吸附中胶乳是普通聚苯乙烯颗粒。

6.根据权利要求1至4任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：胶乳颗粒的粒径范围为50-200nm，优选地，与两个单抗分别进行包被的胶乳颗粒的粒径相同或不同，优选地，包被时胶乳颗粒的浓度范围为0.1-0.5％。

7.根据权利要求1至6任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：试剂1、试剂2中均添加防腐剂，优选地，叠氮钠和PC300，优选地，用量在0.01-0.3％。

8.根据权利要求1至7任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：试剂1中添加浓度为10-100mmol/L的EDTA。

9.根据权利要求1至8任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：用于检测血清的校准品为血清基质，浓度分别为130mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L、12.5mg/L、0mg/L；用于检测尿液的校准品为尿液基质，浓度分别为4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0mg/L。

10.根据权利要求9所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其特征在于：血清基质校准品和尿液基质校准品均含有0.01-0.1％的叠氮钠、0.01-0.2％的制菌霉素。

11.根据权利要求1至9任一项所述的检测视黄醇结合蛋白的双抗包被胶乳增强免疫透射比浊试剂盒，其选自如下组合的试剂盒：

试剂盒1：

试剂1组分：

缓冲液MOPS 0.15mol/L pH＝6.5，

PEG6000 10％，

NaN₃ 0.1％，

EDTA 100mmol/L，

试剂2组分：

缓冲液MOPS 0.15mol/L pH＝8.5，

单克隆抗体A 0.45mg/ml，其为鼠抗人抗体，抗抗原人尿提取视黄醇结合蛋白，效价大于1∶5000，

胶乳颗粒A，104nm，0.35％，用于包被单克隆抗体A，

单克隆抗体B 0.5mg/ml，其为鼠抗人抗体，抗抗原人尿提取视黄醇结合蛋白，效价大于1∶1000，

胶乳颗粒B，77nm，0.5％，用于包被单克隆抗体B，

校准品A：血清校准品，浓度分别为130、100、50、25、12.5、0mg/L，

校准品B：尿液校准品，浓度分别为4、2、1、0.5、0.25、0mg/L，

试剂盒2：

试剂1组分：

缓冲液Tris 0.05mol/L pH＝9，

PEG6000 0.56％，

NaN₃ 0.1％，

EDTA 10mmol/L，

试剂2组分：

缓冲液Tris 0.15mol/L pH＝8.0，

单克隆抗体A 0.15mg/ml，其为鼠抗人抗体，抗抗原人尿提取视黄醇结合蛋白，效价大于1∶5000，

胶乳颗粒A，159nm，0.15％，用于包被单克隆抗体A，

单克隆抗体B 0.12mg/ml，其为鼠抗人抗体，抗抗原人尿提取视黄醇结合蛋白，效价大于1∶1000，

胶乳颗粒B，195nm，0.11％，用于包被单克隆抗体B，

校准品A：血清校准品，浓度分别为130、100、50、25、12.5、0mg/L，

校准品B：尿液校准品，浓度分别为4、2、1、0.5、0.25、0mg/L。