[发明专利]一株产酸蜡样芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株产酸蜡样芽孢杆菌及其应用。 

背景技术

乳酸菌在发酵过程中产生有机酸、各种消化酶及乳酸菌素，畜禽饲料中添加乳酸菌类益生素能有效降低胃肠道内的pH，抑制病原菌的生长，提高饲料报酬，增强畜禽免疫力。近年来乳酸菌类益生素的研究越来越深入。但是，一般乳酸菌的营养要求较高，对不良环境的抵抗力差，特别是抗干燥、抗高温、抗胃酸和胆汁的能力较弱，因此，能活着进入肠道的乳酸菌种类和数量为数不多。普通的乳酸菌对环境耐受性差影响了乳酸菌的应用，它不耐高温，在高温制粒的过程中存活率极低，因此在饲喂颗粒料的生产应用中受到了很大的限制。 

产酸芽孢杆菌是优选出能产乳酸的芽孢菌，兼具乳酸菌和芽孢菌的优势，可作为一种新型的微生物添加剂开发和应用。国内最早报道的产酸芽孢菌是1996年王艳萍等筛选的一株名为TQ33的菌株，后来鉴定TQ33为凝结芽孢杆菌，随后对产酸芽孢菌的研究慢慢展开。苏勇等(2006)研究表明产酸芽孢菌S1能提高断奶后仔猪空肠和结肠食糜中乳酸菌与大肠杆菌的数量比值，而乳酸菌所占比例的提高能够预防仔猪腹泻；研究发现产酸芽孢菌对哺乳仔猪黄白痢有良好的预防效果，连续灌服3d产酸芽孢菌制剂对乳猪黄白痢的预防率可达到99.5％；在仔猪出生时即投喂产酸芽孢菌TPY-211口服液，对防治7日龄内仔猪腹泻有明显效果(P＜0.01)。另外，产酸芽孢菌在肉鸡上的试验也取得了良好的效果，产酸芽孢菌制剂能提高AA肉鸡生产性能，显著提高21～42日龄黄羽肉鸡平均日采食量、平均日增重和饲料转化率，同时可增强试验组肉鸡的免疫性能。不仅如此，产酸芽孢菌在水产养殖中的应用越来越受欢迎，鱼虾颗粒料对制粒条件的要求更加严格，普通的乳酸菌制剂根本不可能成活，因此开发可以产乳酸的芽孢菌不仅能承受高温高压的制粒过程，发挥芽孢菌的优势，并且被鱼虾采食后，可以发挥乳酸菌的优势，起到调节胃肠pH，提高饲料报酬，增强免疫力的作用。 

由上可见，筛选具有产酸能力的芽孢菌不仅具有乳酸菌的优势，而且在发酵后期可以产生芽孢，可以很好地耐受高温、高压的制粒过程，提高存活率。目前所报道的产酸芽孢菌多为凝结芽孢杆菌，尚未见到有产酸蜡样芽孢杆菌的报道。 

发明内容

针对上述现有技术，本发明经筛选得到了一株产酸蜡样芽孢杆菌及其应用，为开发肉禽及水产专用益生素提供了平台。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

一株产酸蜡样芽孢杆菌，该菌株命名为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)，已于2011年10月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC M 2011352。 

所述菌株的菌学特征为：菌落为圆形或近似圆形，呈无色素的白色，菌体细胞杆状，成短或长链，培养48h，菌落不透明，直径可达10mm，表面粗糙，边缘不整齐，平铺似毛玻璃状。产芽孢，中生，革兰氏阳性，无荚膜。 

所述菌株的最适培养条件为：培养基：酵母膏0.5％，蛋白胨0.6％，葡萄糖1.0％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸镁0.02％，硫酸锰0.08％(按质量百分数)，调pH至7.5。最适温度：35℃，好氧。 

本发明还对产酸蜡样芽孢杆菌的液体工业大规模生产的工艺及培养基做了摸索研究，经研究，其最佳培养基配方如下： 

种子培养基：酵母膏0.5％，蛋白胨0.6％，葡萄糖1.0％，磷酸氢二钾0.5％，硫酸镁0.02％，硫酸锰0.08％(按质量百分数)。 

液体发酵培养基：玉米粉：3.0％，豆粉：3.2％，麸皮：2.5％，硫酸铵：0.8％，硫酸镁：0.01％，磷酸氢二钠：1％，磷酸二氢钠：0.075％，柠檬三钠：0.1％(按质量百分数)。 

其最佳生产工艺流程如下： 

(1)一级种子：斜面接种，500mL三角瓶装量100mL，35℃，220rpm摇床培养10～16h；接入二级种子液扩大培养。 

(2)二级种子：5L三角瓶装量1L，接种量6％(v/v)，35℃，220rpm摇床培养12～18h；接入三级种子液扩大培养。 

(3)三级种子：100L发酵罐装量60L，4％(v/v)接种，35℃，220rpm培养10～16h；接入发酵罐进行工业化生产。 

(4)发酵罐培养条件：2％接种(v/v)，35℃，220rpm培养26～32h，镜检形成芽孢90％左右，放罐，喷干，获得芽孢菌粉。