[发明专利]一种培养分离难培养细菌的培养基

说明书

技术领域

本发明属于微生物新种培养分离领域，特别是一种用于分离新菌种的培养基及其制备方法。

背景技术

从细菌对基质的利用及其在自然环境中的生长情况，可以分为四类：I、在高基质下无法生长，却生长迅速；II、在高基质浓度下无法生长，且生长缓慢；III、高基质浓度能够生长，且生长迅速；IV、高基质浓度下能够生长，且生长缓慢。第II类群和第IV类群就是寡营养细菌，相对于第I、III类群细菌来说，难以被培养。另外，一些类型的细菌，其生长需要生长因子的刺激，也难以被分离培养。

现有的新菌种培养基主要基于高营养浓度的溶菌肉汤(Luria-Bertani，LB)培养基或者稀释LB培养基，仅对分离培养前述第III类群的细菌有效，难以分离其他难培养的细菌类群。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种培养分离难培养菌种的培养基及其制备方法，可以从土壤、酸性矿坑水中高效分离难培养细菌

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种培养分离难培养菌种的培养基，以下简称该培养基为V3M培养基，其配方为：每100mL VL55培养基中加入0.3mL氨基酸溶液、10μL溶液I(微量元素)、0.3mL溶液II(有机酸)、0.3mL溶液III(有机糖类)及1.5wt％结冷胶(gellan gum)；

所述VL55培养基配方为，每1L溶液中含有1.95g 2-吗啉乙磺酸(MES，2-[N-morpholino]ethansulfonic acid)、0.2mmolMgSO₄、0.3mmolCaCl₂、0.2mmol(NH4)₂HPO₄、1mL亚硒酸盐-钨酸盐溶液、1mL微量元素溶液、1mLSL-10溶液、1mL维生素溶液I、3mL维生素溶液II，调pH至5.5；

所述VL55培养基中的亚硒酸盐-钨酸盐溶液的配方为，每1L溶液中含有NaOH0.5g、Na₂SeO₃·5H₂O3mg及Na₂WO₄·2H₂O4mg；

所述VL55培养基中的微量元素溶液的配方为，每1L溶液中含有25wt％的HCl10mL、FeCl₂·4H₂O1.5g、CoCl₂·6H₂O190mg、MnCl₂·4H₂O100mg、ZnCl₂70mg、H₃BO₃6mg、Na₂MoO₄·2H₂O36mg、NiCl₂·6H₂O24mg及CuCl₂·2H₂O2mg；

所述VL55培养基中的维生素溶液I的配方为，每1L溶液中含有4-氨基苯甲酸酯40mg、(+)-生物素10mg、烟酸100mg、泛酸150mg、维生素B6150mg、氯硫胺盐酸盐100mg及维生素B1250mg；

所述VL55培养基中的维生素溶液II的配方为，每1L溶液中含有核黄素10mg及叶酸4mg；

所述氨基酸溶液的配方为，每100mL溶液中含有天冬氨酸470mg、苏氨酸210mg、丝氨酸320mg、谷氨酸960mg、脯氨酸690mg、甘氨酸150mg、丙氨酸200mg、缬氨酸220mg、蛋氨酸90mg、异亮氨酸110mg、亮氨酸250mg、酪氨酸70mg、苯丙氨酸140mg、赖氨酸350mg、组氨酸100mg及精氨酸150mg；

所述溶液I的配方为，每100mL溶液中含有SrCl₂·6H₂O4mg、Na₂SiO₃·9H₂O3mg、TiO₂3mg、Cd(NO₃)₂·4H₂O2mg及SnCl₂·2H₂O2mg；